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上海恒遠為您解析如何確定ELISA抗原和抗體的稀釋倍數(shù)

來源:上海恒遠生物科技有限公司   2021年02月01日 14:14  
在運用ELISA方法測定抗體方面,通常所用的方法稱為間接法,也是目前常用的方法,其原理:間接法首先用抗原包被于固相載體,這些包被的抗原必須是可溶性的,或者至少是極微小的顆粒,經(jīng)洗滌,加入含有被測抗體之標本,再經(jīng)孵育洗滌后,加入酶標記抗抗體,(對人的標本來說即加酶標抗人球蛋白IgG、IgM),再經(jīng)孵育洗滌后,加底物顯色,底物降解的量,即為欲測抗體的量,其結(jié)果可用目測或用分光光度計定量測定。
 
操作步驟:
1.將抗原按5 μg/ml稀釋于碳酸鹽緩沖液(pH 9.6),100 μl /孔,4℃過夜。
2.次日PBS-T清洗4次(快1慢3,間隔5分鐘)。
3.加2%BSA封閉室溫1 h,200 μl /孔。
4.陽性對照從10ug/ml,做倍必稀釋,待測血清從1:50做倍比稀釋,預(yù)試驗后確定稀釋倍數(shù)及陽性對照的起始濃度及稀釋數(shù)量(以可以做標準曲線為參數(shù)),室溫1h。
5.PBS-T清洗4次(快1慢3,間隔5分鐘)。
6.加入1:3000(不同公司有不同的推薦稀釋度) PBS-T稀釋的HRP標記的山羊抗人IgG,100 μl /孔,室溫1h。
7.PBS-T清洗4次(快1慢3,間隔5分鐘)。 
8.顯色,100 μl /孔,顏色變深后中止顯色,2M硫酸在BIO-RAD酶標儀上讀數(shù),可用ABTS,OPD,TMB等
 
上海恒遠經(jīng)過數(shù)年的努力,已迅速成為集科研和生產(chǎn)為一體的專業(yè)化生物企業(yè),產(chǎn)品國內(nèi)大部分地區(qū),銷售額逐年穩(wěn)步提高,擁有雄厚的實力、合理的價格和優(yōu)良的服務(wù),能夠及時解決和滿足客戶的各方面的需求,與國內(nèi)多家科研機構(gòu)、企業(yè)、高校建立了良好的長期合作關(guān)系。如有需要,歡迎咨詢。
 

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