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液相色譜儀常見的問題及解決方法分享
液相色譜儀法是在經(jīng)典色譜法的基礎(chǔ)上引用了氣相色譜的理論。在技術(shù)上，流動相改為高壓輸送；色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成，從而使柱效大大高于經(jīng)典液相色譜（每米塔板數(shù)可達幾萬或幾十萬）；同時，柱后連有高靈敏度的檢測器可對流出物進行連續(xù)檢測。
只要求試樣能制成溶液，而不需要氣化，因此，不受試樣揮發(fā)性的限制。對于高沸點、熱穩(wěn)定性差、相對分子量大（大于400以上）的有機物（些物質(zhì)幾乎占有機物總數(shù)的75%-80%）原則上都可應(yīng)用高效液相色譜法來進行分離、分析。據(jù)統(tǒng)計，在已知化合物中能用氣相色譜分析的約占20%，而能用液相色譜分析的約占70-80%。
液相色譜儀的常見問題及解決方法介紹：
(一)保留時間變化
1.柱溫變化：柱恒溫，必要時需配置恒溫箱
2.等度與梯度間未能充分平衡：至少用10倍柱體積的流動相平衡柱
3.緩沖液容量不夠：用》25mmol/L的緩沖液
4.柱污染：每天沖洗柱
5.柱內(nèi)條件變化：穩(wěn)定進樣條件,調(diào)節(jié)流動相
6.柱快達到壽命：采用保護柱
(二)保留時間縮短
1.流速增加：檢查泵,重新設(shè)定流速
2.樣品超載：降低樣品量
3.鍵合相流失：流動相pH值保持在3~7.5檢查柱的方向
4.流動相組成變化：防止流動相蒸發(fā)或沉淀
5.溫度增加：柱恒溫
(三)鬼峰
1.進樣閥殘余峰：每次用后用強溶劑清洗閥,改進閥和樣品的清洗
2.樣品中未知物：處理樣品
3.柱未平衡：重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑 (尤其是離子對色譜)
4.三弗乙酸(TFA)氧化(肽譜) ：每天新配,用抗氧化劑
5.水污染(反相) ：通過變化平衡時間檢查水質(zhì)量，用HPLC級的水
(四) 基線噪聲
1.氣泡(尖銳峰) 流動相脫氣：加柱后背壓
2.污染(隨機噪聲) ：清洗柱,凈化樣品,用HPLC級試劑
3.檢測器燈連續(xù)噪聲：更換氘燈
4.電干擾(偶然噪聲) ：采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來源(如水浴等)
5.檢測器中有氣泡：流動相脫氣,加柱后背壓
好了，以上便是關(guān)于液相色譜儀的相關(guān)內(nèi)容介紹了。
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