恒遠為您講解ELISA實驗之空白孔的設(shè)置

來源：上海恒遠生物科技有限公司 2021年03月04日 10:15

今天上海恒遠為大家講解ELISA實驗技巧中的空白孔對照。

ELISA試劑盒ELISA空白對照有幾種：

1. 空氣空白水空白：一般是用于儀器調(diào)零的,所有孔數(shù)值減掉該孔數(shù)值。

2.底物空白：一般是用于防止底物弱顯色所造成的讀數(shù)偏高，同樣所有孔數(shù)值減掉該孔數(shù)值（只加底物和終止液）

3. 酶空白：一般在2步法實驗中使用，主要是看酶是否和板有非特異性結(jié)合的，一般不做這個。

ELISA空白孔一般設(shè)一個，這是為了減除顯色液的OD值。而陰性和陽性標準品設(shè)2個復孔，雖然有點浪費，但為了確保實驗的可靠性，我認為還是很有必要的。ELISA空白孔加什么？一般兩個做法，看個人習慣或者說看你們實驗室的習慣：

1，什么都不加，然后那個孔按照操作流程來做，這個說法的根據(jù)就是空白，也就是什么都沒有。

2，加樣本稀釋液，然后按照操作流程來做。這個做法的根據(jù)就是只要不含陽性物質(zhì)就算是空白的，加入樣本稀釋液的目的是為了使這個孔除了在沒有陽性物質(zhì)上其他的都與其他孔一致。

怎麼控制顯色時間？

顯色時間要通過預實驗找到所測所有sample的顯色OD在0.1到2.0的有效range間，我用過OPD solution，一般incubation for 15min at RT，測一次然后立即加入stop solution 在測一次。

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