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恒遠(yuǎn)為您講解ELISA實(shí)驗(yàn)之空白孔的設(shè)置
今天上海恒遠(yuǎn)為大家講解ELISA實(shí)驗(yàn)技巧中的空白孔對照。
ELISA試劑盒ELISA空白對照有幾種：
1. 空氣空白水空白：一般是用于儀器調(diào)零的,所有孔數(shù)值減掉該孔數(shù)值。
2.底物空白：一般是用于防止底物弱顯色所造成的讀數(shù)偏高，同樣所有孔數(shù)值減掉該孔數(shù)值（只加底物和終止液）
3. 酶空白：一般在2步法實(shí)驗(yàn)中使用，主要是看酶是否和板有非特異性結(jié)合的，一般不做這個(gè) 。
ELISA空白孔一般設(shè)一個(gè)，這是為了減除顯色液的OD值。而陰性和陽性標(biāo)準(zhǔn)品設(shè)2個(gè)復(fù)孔，雖然有點(diǎn)浪費(fèi)，但為了確保實(shí)驗(yàn)的可靠性，我認(rèn)為還是很有必要的。ELISA空白孔加什么？一般兩個(gè)做法，看個(gè)人習(xí)慣或者說看你們實(shí)驗(yàn)室的習(xí)慣：
1，什么都不加，然后那個(gè)孔按照操作流程來做，這個(gè)說法的根據(jù)就是空白，也就是什么都沒有。
2，加樣本稀釋液，然后按照操作流程來做。這個(gè)做法的根據(jù)就是只要不含陽性物質(zhì)就算是空白的，加入樣本稀釋液的目的是為了使這個(gè)孔除了在沒有陽性物質(zhì)上其他的都與其他孔一致。
怎麼控制顯色時(shí)間？
顯色時(shí)間要通過預(yù)實(shí)驗(yàn)找到所測所有sample的顯色OD在0.1到2.0的有效range間，我用過OPD solution，一般incubation for 15min at RT，測一次然后立即加入stop solution 在測一次。
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