国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學(xué)|元素分析|水分測(cè)定儀|樣品前處理|試驗(yàn)機(jī)|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>技術(shù)參數(shù)>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)常見問題解析

來源:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司   2021年03月05日 09:23  

酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)常見問題因靈敏度高,特異性強(qiáng)在生物科研上得到了廣泛的認(rèn)可,但對(duì)初學(xué)者而言,如不注意實(shí)驗(yàn)操作過程中的各個(gè)環(huán)節(jié),可能會(huì)對(duì)終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生比較大的影響,比如實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)白板,顯色弱靈敏度低,花板無梯度背景高等現(xiàn)象。下面對(duì)以上實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象進(jìn)行一一解析。

1.白板現(xiàn)象
在完成所有實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行底物TMB溶液顯色后,酶標(biāo)板中所有孔的顏色均為無色,即無信號(hào)呈現(xiàn)。
出現(xiàn)該現(xiàn)象的可能原因:
試劑已過保質(zhì)期,不同批次稀釋液交叉使用。
錯(cuò)加漏加檢測(cè)A,檢測(cè)B或者底物溶液TMB。
洗板或者加樣過程中,酶標(biāo)記物被污染失活,稀釋液中含有酶抑制劑如疊氮吶等。
配置稀釋液的蒸餾水可能被污染。
洗滌液是濃縮型的,沒有按比例進(jìn)行稀釋。
酶標(biāo)記物的活性和效價(jià)比較低。
溶液的PH值不正確,一般稀釋液的PH值應(yīng)保持在7.2-7.4。
 
2.顯色弱靈敏度低
在完成所有實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行底物TMB溶液顯色后,酶標(biāo)板中孔的顯色比較淺,即只有微弱的信號(hào)呈現(xiàn)。
出現(xiàn)該現(xiàn)象的可能原因:
產(chǎn)品過有效期,試劑沒有按規(guī)定進(jìn)行適當(dāng)?shù)谋4妗?/span>
試劑,標(biāo)準(zhǔn)品或者樣品在使用前沒有平衡到室溫。
少加了試劑的量或者加入試劑的稀釋比例不當(dāng)。
洗板或者加樣過程中,酶標(biāo)物受污染失活。
孵育時(shí)間和孵育溫度未達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求。
洗滌液稀釋倍數(shù)不符合要求,洗板次數(shù)過多,洗板沖擊力過大,洗板浸泡時(shí)間過長。
底物溶液TMB顯色時(shí)間太短。
 
3.花板無梯度背景高
在完成所有實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行底物TMB溶液顯色后,酶標(biāo)板中的孔有顏色但沒有梯度,背景也可能較高,。
出現(xiàn)該現(xiàn)象的可能原因:
底物溶液TMB未置于陰涼避光處保存,實(shí)驗(yàn)前溶液已經(jīng)變藍(lán)。
孵育溫度過高或者孵育時(shí)間過長,發(fā)生了較強(qiáng)的非特異性吸附。
沒有按說明書要求洗板,特別是洗板時(shí)洗滌液的量少加了。
加樣時(shí)沒有換槍頭造成交叉污染。
花板現(xiàn)象:低濃度或者低活性的包被抗體或者檢測(cè)抗體,封閉不足導(dǎo)致的本底不穩(wěn)定,洗板不充分,包被板子的問題。
 
綜上所述:在ELISA實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意以下問題:
1.在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)該按相關(guān)要求將實(shí)驗(yàn)試劑平衡至室溫。
2.包被抗體和檢測(cè)抗體應(yīng)該是有高活性的且都針對(duì)同一抗原。
3.試劑保存:蛋白抗體類試劑保存于-20攝氏度,顯色液洗滌液保存于2-8攝氏度。
4.各試劑在使用前應(yīng)充分混勻,以保證試劑的均一性和準(zhǔn)確性。
5.嚴(yán)格控制反應(yīng)溫度和反應(yīng)試劑。
6.洗板次數(shù),洗板液的量,洗板液浸泡時(shí)間的長短,洗板的力度都是應(yīng)該注意的問題。
7.相關(guān)濃縮液應(yīng)按要求稀釋到相應(yīng)比例方可使用,PH值要保持在7.2-7.4之間。
8.在終止反應(yīng)時(shí)盡量避免微孔中存有氣泡。
9.終止反應(yīng)完成后應(yīng)該在2min內(nèi)完成酶標(biāo)儀讀數(shù)。

             

      

免責(zé)聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
  • 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
璧山县| 台湾省| 宁乡县| 彭泽县| 井研县| 谢通门县| 临潭县| 永川市| 垣曲县| 志丹县| 乾安县| 新郑市| 仪陇县| 寿阳县| 大新县| 尼勒克县| 蕉岭县| 隆回县| 清远市| 武安市| 娄烦县| 紫云| 宕昌县| 河北区| 繁峙县| 和平区| 太仆寺旗| 四子王旗| 屯门区| 邵阳县| 同江市| 平乡县| 九寨沟县| 湖南省| 枣强县| 海口市| 塔城市| 宣城市| 桑植县| 孟连| 右玉县|