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大鼠血漿的操作規(guī)程究竟是怎樣的？
1、大鼠取全血3.5或4.5ml,放置40min左右,4000r/10min離心。
2、向1.5mlEP管中依次加入20u1內(nèi)標(biāo)液、A中血漿100或150ul,渦旋30s,置-20℃凍存至樣品處理。
3、取大鼠血漿體積100或150u1(先放置4℃融化再拿至室溫),渦旋30秒,加入沉淀(甲醇:乙腈=1:3)400或600u1或萃取劑(乙酸乙酯)800或1200u1,渦旋1.5min14000r/10min離心。
4、取上清液加入1.5mlEP管:沉淀劑時(shí)為450或ul;萃取劑時(shí)為或ul。
5、氮?dú)獯蹈?0-45℃(吹干時(shí)間沉淀劑為45min左右,萃取劑為30min左右)。
6、用100u1甲醇復(fù)溶,渦旋2min,1400r/10min離心。
7、進(jìn)樣瓶處理:先加入100u1甲醇,放入內(nèi)插管。
8、取上層液體90ul加入進(jìn)樣瓶?jī)?nèi)插管中,將瓶蓋用保鮮膜包裹后蓋上放入4℃至進(jìn)樣。
9、用液相進(jìn)樣時(shí)體積為10或20u。
大鼠血漿的操作注意事項(xiàng)？
1、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所使用的耗材都為進(jìn)口級(jí)(EP管,槍頭等),除取全血時(shí)EP管使用國(guó)產(chǎn)。
2、需要血漿量根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果制定選擇100或150u1。
3、加入血漿及20u1內(nèi)標(biāo)液時(shí)一定要認(rèn)真,細(xì)心,加藥過(guò)程嚴(yán)格按照移液槍操作規(guī)程,保證結(jié)果的準(zhǔn)確度、精密度。
4、實(shí)驗(yàn)過(guò)程樣品處理時(shí)EP管標(biāo)號(hào)一定要清楚、仔細(xì),操作過(guò)程做好有一個(gè)人在旁邊檢査或處理完一個(gè)換一個(gè)位置。
5、實(shí)驗(yàn)樣品處理一定要一套一套處理(一只鼠的樣品一次處理完畢),以減小結(jié)果誤差同時(shí)樣品不容易混淆、出錯(cuò)。
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