隨著科研事業(yè)的崛起,越來越多的人選擇ELISA檢測法來做實驗,雖說ELISA實驗的原理及操作簡單,但是由于實驗的特殊性,各個方法也都是影響到實驗結(jié)果的因素之一。有操作員反應(yīng):做了很多次ELISA實驗,每次都能夠得到線性比較好的標準曲線,但是同樣濃度的標準品每次的OD值都不一致,猜可能是酶標板的問題,有什么方法可以快速驗證酶標板的可靠性嗎?
我公司實驗技術(shù)專員解讀【ELISA酶標板可靠性】的驗證原理:
ELISA本身靈敏性很高,每次做出來的值不一樣很正常,特別是od值比較大的時候更是差別很大,但是只要不要偏差太大就好,一般偏差要求10%內(nèi)吧,好的數(shù)據(jù)是3%內(nèi)。
首先要穩(wěn)定所有的條件,不同的條件下做的板子讀值不一樣很正常。在同樣條件下同批次的板子,如果測定不一樣,就是包被問題或者保護劑的問題,但這兩個都是各個試劑盒的機密,看看文獻里別人怎么做的。
其次每次實驗的標曲上同一濃度樣品的OD值不一樣是很正常的,這與抗原抗體反應(yīng)體系、作用時間、顯色時間等等一系列的因素有關(guān)。鑒定該ELISA體系是否可靠,關(guān)鍵的指標是加標回收率和稀釋線性,如果你懷疑的話可以做一下。
一般來說,國外廠商的ELISA試劑盒是沒有問題的。同時你還要看一下說明書中ELISA試劑盒的靈敏度,如果樣品濃度低于該檢測下限,則無法檢測到,這是很正常的現(xiàn)象,并不是非要每個樣品都要測出值才可以。
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