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PCR檢測(cè)試劑盒DNA復(fù)制用三個(gè)步驟的實(shí)現(xiàn)方法
PCR檢測(cè)試劑盒的實(shí)驗(yàn)室檢查：
一般檢查
血常規(guī)：部分病例可有白細(xì)胞和血小板減少。
血清學(xué)檢查
1.寨卡病毒IgM檢測(cè)：采用酶聯(lián)免疫吸附法、免疫熒光法等進(jìn)行檢測(cè)。
2.寨卡病毒中和抗體檢測(cè)：采用空斑減少中和試驗(yàn)檢測(cè)血液中和抗體。應(yīng)盡量采集急性期和恢復(fù)期雙份血清開(kāi)展檢測(cè)。
寨卡病毒抗體與同為黃病毒屬的登革病毒、黃熱病毒和西尼羅病毒抗體等有較強(qiáng)的交叉反應(yīng)，易于產(chǎn)生假陽(yáng)性，在診斷時(shí)應(yīng)注意鑒別。
病原學(xué)檢查
1.病毒核酸檢測(cè)：采用熒光定量RT-PCR檢測(cè)寨卡病毒。
2.病毒抗原檢測(cè)：采用免疫組化法檢測(cè)寨卡病毒抗原。
3.病毒分離培養(yǎng)：可將標(biāo)本接種于蚊源細(xì)胞或哺乳動(dòng)物細(xì)胞等方法進(jìn)行分離培養(yǎng)，也可使用乳鼠腦內(nèi)接種進(jìn)行病毒分離。
PCR檢測(cè)試劑盒DNA復(fù)制用三個(gè)步驟的實(shí)現(xiàn)方法是：
1、變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備；
2、退火：退火也叫復(fù)性，模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，在這個(gè)溫度下，模板DNA單鏈能夠與引物的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合；所謂引物，是一段已經(jīng)確定好的DNA的片段，通過(guò)引物找到模板DNA的相應(yīng)位置，也就是確定了復(fù)制的起點(diǎn)；
3、延伸：DNA模板-引物結(jié)合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP（脫氧核糖核苷三磷酸，可構(gòu)成DNA）為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則和半保留復(fù)制原理，就能合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的復(fù)制鏈。
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