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色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對(duì)色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。市售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、氧化鋁、有機(jī)聚合物微球（包括離子交換樹脂）、多孔碳等，其粒度一般為3,5,7,10μm等，柱效理論值可達(dá)5~16萬/米。對(duì)于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效。
死體積狹義上指的是色譜柱中未被固定相占據(jù)的空隙體積，即色譜柱內(nèi)流動(dòng)相的體積。廣義上的死體積是指進(jìn)樣位置（進(jìn)樣口）到檢測(cè)位置（檢測(cè)器流通池）這一段的體積（PS:除去色譜柱中填料體積），一旦色譜柱連接，這段體積是不變的（死的）。
死體積狹義上指的是色譜柱中未被固定相占據(jù)的空隙體積，即色譜柱內(nèi)流動(dòng)相的體積。廣義上的死體積是指進(jìn)樣位置（進(jìn)樣口）到檢測(cè)位置（檢測(cè)器流通池）這一段的體積（PS:除去色譜柱中填料體積），一旦色譜柱連接，這段體積是不變的（死的）。
對(duì)于HPLC來說，該如何計(jì)算死體積呢。
死體積(dead volume,V0)——由進(jìn)樣器進(jìn)樣口到檢測(cè)器流動(dòng)池未被固定相所占據(jù)的空間。它包括4部分：進(jìn)樣器至色譜柱管路體積、柱內(nèi)固定相顆粒間隙（被流動(dòng)相占據(jù)，Vm）、柱出口管路體積、檢測(cè)器流動(dòng)池體積。其中只有Vm參與色譜平衡過程，其它3部分只起峰擴(kuò)展作用。為防止峰擴(kuò)展，這3部分體積應(yīng)盡量減小。
死時(shí)間(dead time,t0)——不保留組分的保留時(shí)間。即流動(dòng)相（溶劑）通過色譜柱的時(shí)間。
測(cè)量系統(tǒng)死體積通常需要通過實(shí)驗(yàn)進(jìn)行測(cè)量，常用方法是通過進(jìn)一針和色譜柱固定相沒有任何作用的特殊溶液（方法中會(huì)有規(guī)定，例如：尿嘧啶，少量NaNO3或甲醇溶于流動(dòng)相得到的溶液，也有直接用100％色譜純甲醇進(jìn)樣的情形）時(shí)，就會(huì)得到一個(gè)色譜峰，由此峰可以測(cè)得死時(shí)間（t0），這就是t0的實(shí)測(cè)結(jié)果。
然后通過計(jì)算得到系統(tǒng)死體積:死體積（V0) = 死時(shí)間t0×流動(dòng)相的流速F。
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