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色譜柱的死體積是什么,怎么計(jì)算

來(lái)源:滕州市艾倫分析儀器有限公司   2021年04月08日 09:00  
   色譜是一種分離分析手段,分離是核心,因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對(duì)色譜柱的要求是柱效高、選擇性好,分析速度快等。市售的用于HPLC的各種微粒填料如多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、氧化鋁、有機(jī)聚合物微球(包括離子交換樹(shù)脂)、多孔碳等,其粒度一般為3,5,7,10μm等,柱效理論值可達(dá)5~16萬(wàn)/米。對(duì)于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效。

 


   死體積狹義上指的是色譜柱中未被固定相占據(jù)的空隙體積,即色譜柱內(nèi)流動(dòng)相的體積。廣義上的死體積是指進(jìn)樣位置(進(jìn)樣口)到檢測(cè)位置(檢測(cè)器流通池)這一段的體積(PS:除去色譜柱中填料體積),一旦色譜柱連接,這段體積是不變的(死的)。

   對(duì)于HPLC來(lái)說(shuō),該如何計(jì)算死體積呢。 
   死體積(dead volume,V0)——由進(jìn)樣器進(jìn)樣口到檢測(cè)器流動(dòng)池未被固定相所占據(jù)的空間。它包括4部分:進(jìn)樣器至色譜柱管路體積、柱內(nèi)固定相顆粒間隙(被流動(dòng)相占據(jù),Vm)、柱出口管路體積、檢測(cè)器流動(dòng)池體積。其中只有Vm參與色譜平衡過(guò)程,其它3部分只起峰擴(kuò)展作用。為防止峰擴(kuò)展,這3部分體積應(yīng)盡量減小。

   死時(shí)間(dead time,t0)——不保留組分的保留時(shí)間。即流動(dòng)相(溶劑)通過(guò)色譜柱的時(shí)間。

   測(cè)量系統(tǒng)死體積通常需要通過(guò)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行測(cè)量,常用方法是通過(guò)進(jìn)一針和色譜柱固定相沒(méi)有任何作用的特殊溶液(方法中會(huì)有規(guī)定,例如:尿嘧啶,少量NaNO3或甲醇溶于流動(dòng)相得到的溶液,也有直接用100%色譜純甲醇進(jìn)樣的情形)時(shí),就會(huì)得到一個(gè)色譜峰,由此峰可以測(cè)得死時(shí)間(t0),這就是t0的實(shí)測(cè)結(jié)果。

   然后通過(guò)計(jì)算得到系統(tǒng)死體積:死體積(V0) = 死時(shí)間t0×流動(dòng)相的流速F。

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