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掃描電鏡樣品的處理過(guò)程介紹

來(lái)源:上海曼戈斐光學(xué)技術(shù)有限公司   2021年04月16日 15:08  
掃描電鏡(SEM)是介于透射電鏡和光學(xué)顯微鏡之間的一種微觀形貌觀察手段,可直接利用樣品表面材料的物質(zhì)性能進(jìn)行微觀成像。掃描電鏡的結(jié)構(gòu)包括電子光學(xué)系統(tǒng)、圖像顯示和記錄系統(tǒng)、真空系統(tǒng)、X射線能譜分析系統(tǒng)。其基本原理是用極細(xì)的電子束在樣品表面上掃描,然后按電視原理放大成像,顯示在電視屏幕上。
 
掃描電鏡樣品的處理過(guò)程:
 
主要包括表面清潔、固定、漂洗和脫水等過(guò)程,基本上與透射電鏡樣品的處理方法相似,但也有其特殊之處。
 
1. 樣品大小 所切取樣品比透射電鏡樣品稍大一些,為8~10mm2,高約5mm。
 
2. 清潔表面 清潔表面并充分暴露樣品表面。常用清洗液有蒸餾水、生理鹽水、緩沖液及含酶的清洗液等。
 
3. 固定和脫水 常用的固定方法是戊二醛-四氧化餓雙重固定,也可用戊二醛單固定法。
 
常用脫水劑是乙醇或丙酮。脫水劑濃度梯度增加,從30%或50%開始至100%進(jìn)行脫水;易變形樣品脫水劑濃度梯度宜緩慢遞增。
 
4. 樣品的干燥 脫水后,需要將樣品中的脫水劑*揮發(fā)干凈,即樣品干燥。其方法有:空氣干燥 、真空干燥、冷凍干燥和臨界點(diǎn)干燥。
 
5. 樣品表面導(dǎo)電處理 用金屬鍍膜法和組織導(dǎo)電處理技術(shù),一是可增強(qiáng)導(dǎo)電能力,消除荷電效應(yīng);二是增加樣品表面二次電子發(fā)射率,加強(qiáng)訊號(hào),提高圖像反差。
 
(1)金屬鍍膜:使樣品表面覆蓋薄層金屬膜,這層薄膜與樣品表面的凹凸形態(tài)*一致,使標(biāo)本表面的形貌得以反映。常用的金屬有金、鉑、鉬、或金/鉑、鉑/銫合金。鍍膜的方法有真空鍍膜法和離子濺射法。
 
(2)組織導(dǎo)電技術(shù):其目的是為提高導(dǎo)電率克服生物材料的荷電效應(yīng),提高樣品表面二次電子發(fā)射率。組織導(dǎo)電處理也稱導(dǎo)電染色,是利用某些金屬鹽類能與生物材料中的蛋白質(zhì)、脂類和淀粉等結(jié)合,使樣品表面離子化,使組織導(dǎo)電性增加;并且提高二次電子的發(fā)射率??捎么姿徕櫋⒌饣?、丹寧酸等處理標(biāo)本。

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