ATCC細(xì)胞注意事項：

1、首先肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，然后再借助顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張），這樣做可方便后期的對比。

2、一定要用75%的酒精消毒（75%的酒精的水要經(jīng)過殺菌處理）。

3、嚴(yán)格按照在無菌環(huán)境下操作的原則，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

4、將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（要換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。

5、用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。

6、1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。

7、換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

ATCC細(xì)胞操作流程：

主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡），co2孵箱。

細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：

細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng):從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,同時不斷搖動使之迅速融化，然后用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。

細(xì)胞傳代:原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細(xì)胞。