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ATCC細(xì)胞注意事項(xiàng)方法

來源:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司   2021年04月21日 10:58  

ATCC細(xì)胞注意事項(xiàng):

1、首先肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,然后再借助顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張),這樣做可方便后期的對(duì)比。

2、一定要用75%的酒精消毒(75%的酒精的水要經(jīng)過殺菌處理)。

3、嚴(yán)格按照在無菌環(huán)境下操作的原則,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

4、將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(要換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。

5、用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。

6、1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。

7、換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。

ATCC細(xì)胞操作流程:

主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡),co2孵箱。

細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存:

細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng):從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,同時(shí)不斷搖動(dòng)使之迅速融化,然后用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預(yù)熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。

細(xì)胞傳代:原代培養(yǎng)的hek-293細(xì)胞48h換液1次,細(xì)胞長(zhǎng)至60%~70%融合時(shí),用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散,為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細(xì)胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴(kuò)增細(xì)胞。

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