山梨醇脫氫酶測試盒分析說明
產(chǎn)品說明: SDH(EC 1.1.1.14)催化山梨醇脫氫生成果糖,是調(diào)控生物體內(nèi)山梨醇含量的關(guān)健酶之一。SDH 催化山梨醇 脫氫生成果糖,同時還原 NAD+生成 NADH,生成的 NADH 能將電子傳遞給 NBT 生成紫色的甲臜,根據(jù)這一原 理可以計算 SDH 活性。
注意:實驗之前建議選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品: 可見分光光度計、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
山梨醇脫氫酶測試盒分析說明
樣本處理
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(10 4個):提取液體積 (mL)為 500~1000:1 的比例加入提取液(建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1 mL 提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì) 胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);8000 ×g 4℃離心 10 min,取上清,置冰上待 測。
2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1 g 組織,加入 1 mL 提取液), 進(jìn)行冰浴勻漿。8000 ×g 4℃離心 10 min,取上清,置冰上待測。
3、血清(漿)樣本:直接檢測。
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