熒光定量PCR因操作方便、運(yùn)行速度快、實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確,受到越來越多的分子生物學(xué)研究者青睞。想要選擇一款適合自己需求的熒光定量PCR儀時(shí)我們?cè)撽P(guān)注些什么呢?
1.儀器的檢測(cè)通量
在購(gòu)買定量PCR儀的時(shí)候要根據(jù)實(shí)驗(yàn)實(shí)的需要來選擇不同通量的儀器。目前市面上的熒光定量PCR的檢測(cè)通量小到16個(gè)多到384個(gè)。如果進(jìn)行一般的基因表達(dá)研究或病原體檢測(cè),實(shí)在不必購(gòu)買昂貴的儀器,96孔的通量足夠用;需要尋找要新藥靶點(diǎn)和疾病標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)室可以考慮購(gòu)買384孔板的儀器。假如經(jīng)費(fèi)有限無法購(gòu)買384孔板儀器的實(shí)驗(yàn)室,可以考慮購(gòu)買運(yùn)行速度快(帶有FAST模塊)的96孔板熒光定量PCR儀。有了高通量的儀器,你會(huì)發(fā)現(xiàn)樣品的制備和小體系、多樣本的PCR體系構(gòu)建成為限制實(shí)驗(yàn)速度和結(jié)果的頸瓶。所以高通量的實(shí)驗(yàn)室往往需要進(jìn)一步的自動(dòng)化儀器,只要“按一下鈕”,儀器就會(huì)自動(dòng)處理樣品、純化核酸和制備PCR模板。
2.多重?cái)U(kuò)增的能力
多重?cái)U(kuò)增越來越熱。實(shí)時(shí)定量PCR儀也不能幸免。定量PCR儀擁有多個(gè)檢測(cè)通道,因而儀器就可以檢測(cè)同一個(gè)樣品槽里多個(gè)模板的擴(kuò)增過程。不過多重?cái)U(kuò)增并非人人適用,因?yàn)樗箤?shí)驗(yàn)復(fù)雜化了。
3.軟件
當(dāng)你準(zhǔn)備選擇一臺(tái)定量PCR儀,你必須要檢測(cè)附帶的軟件。使用方便嗎,是否可以進(jìn)行你所需要的分析,輸出格式有幾種。不過,你需要留意,太容易使用的軟件是不是功能比較簡(jiǎn)單而無法進(jìn)行復(fù)雜計(jì)算,以前的軟件還需要你做進(jìn)一步分析,新的軟件已經(jīng)可以處理一切了。除了基本功能,部分軟件還可以有更多的功能,比如引物和探針設(shè)計(jì)、多重分析設(shè)計(jì)、背景校正、數(shù)據(jù)歸一化等等。
4.靈活性
大規(guī)模繁忙的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備先進(jìn)固然令人羨慕,常規(guī)的實(shí)驗(yàn)室同樣可以有精彩的選擇?,F(xiàn)在的供應(yīng)商都擁有眾多的技術(shù)專家,不單了解你的目前需要,還非常周到地為你考慮了以后可能的需求變化,比如提供多種可升級(jí)配件和模塊。當(dāng)實(shí)驗(yàn)室需要較大規(guī)模實(shí)驗(yàn)時(shí),可以非常經(jīng)濟(jì)地升級(jí),從1個(gè)增加到6個(gè)基本模塊,也就是96樣品孔。雖然不能用96孔板,但是當(dāng)一個(gè)學(xué)生開始小量實(shí)驗(yàn),其他人還可以隨時(shí)插進(jìn)去開始自己的獨(dú)立實(shí)驗(yàn),而且互不干擾,就是增加了靈活性。對(duì)于剛開始只做少量實(shí)驗(yàn)而且預(yù)算較緊張的實(shí)驗(yàn)室來說是非常靈活的選擇。
5.不確定性
盡管軟件可以做部分修正,購(gòu)買一臺(tái)系統(tǒng)誤差較少的儀器,無需那么多計(jì)算修正總比靠計(jì)算修正好。要特別注意儀器樣品孔之間的差異性。除了樣品孔之間的溫度差異,還有樣品孔和檢測(cè)探頭之間光程距離、負(fù)責(zé)收發(fā)和傳遞信號(hào)的光纖長(zhǎng)度的微小差別、透鏡和樣品孔間的距離和角度的微小差別、甚至樣品槽對(duì)信號(hào)傳遞的影響。很多時(shí)候,不同樣品孔之間會(huì)有不同的結(jié)果。
6.試劑盒的選擇
盡管銷售人員會(huì)吹噓有出色質(zhì)量控制的試劑盒和解決方案就會(huì)得到一至的結(jié)果,但購(gòu)買現(xiàn)成的試劑盒并不是解決差異性的辦法。認(rèn)真的評(píng)估實(shí)驗(yàn)和分析實(shí)驗(yàn)才是解決之道。
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