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噬菌體篩選打破傳統(tǒng)優(yōu)點更多

來源:安諾倫(北京)生物科技有限公司   2021年05月25日 15:52  
   噬菌體篩選是一個非常特殊的物種,以寄生細菌為生。病毒的繁殖方式是通過改造宿主細胞的運作方式,使其產(chǎn)生更多的病毒而不再分裂新的細胞。一個病毒侵入細菌之后,幾個小時的時間內(nèi)就會復(fù)制出數(shù)以千計的病毒并釋放出來,然后新的病毒又會進入新的循環(huán)。這種指數(shù)式增長的能力使噬菌體可以*滅絕它們的宿主種群,進而自身也會滅絕——這就是公地悲劇在生物界的例子。一個比較“謹慎”的噬菌體種群會降低自己的增殖速率。
  能與宿主發(fā)生特異性結(jié)合并注入其DNA,如能發(fā)生增殖并使宿主細菌迅速裂解引起溶菌反應(yīng)的噬菌體,稱為裂解性或毒性噬菌體;與細菌DNA同步復(fù)制,并隨細菌的分裂而傳給后代,不會導(dǎo)致細菌裂解,但在外界條件的刺激下,可從宿主DNA中剪接出來,利用宿主細胞內(nèi)的酶系和蛋白進行自我復(fù)制,引起溶菌反應(yīng)而釋放出噬菌體,稱為溶源性噬菌體。由于溶源性細菌能抵抗相應(yīng)烈性噬菌體的溶菌作用,不適合用與持續(xù)的噬菌體治療,所以噬菌體治療必須選用烈性噬菌體。裂解性噬菌體在溶解其特異性宿主細菌時十分有效,而且其殺死細菌的機制與抗生素不同,已成為目前抗生素替代品中的研究熱點。
  目前,噬菌體篩選的篩選工作已經(jīng)成為噬菌體領(lǐng)域發(fā)展的瓶頸問題,特別是對于一些稀有的特殊目標菌株如古細菌、條件菌株等,噬菌體的篩選工作異常艱難。另外,噬菌體的篩選效率決定了噬菌體制劑的研發(fā)效率,是一款噬菌體制劑有效性的決定因素。現(xiàn)在常用的噬菌體篩選方案是通過將采集的噬菌體分離原液直接與處于對數(shù)生長期的菌液進行混合,使樣品中的噬菌體顆粒與其目標菌株結(jié)合后進入噬菌體繁殖復(fù)制周期,從而達到富集噬菌體的目的。然而,應(yīng)用該方法進行篩選時,常常由于受到噬菌體分離液體積的限制,無法同時進行多株宿主菌的噬菌體篩選工作。同時,如果降低單次富集的噬菌體分離液的體積則會大大降低噬菌體顆粒與宿主菌接觸的概率,降低篩出率。因此,為了滿足噬菌體制劑研發(fā)過程中大規(guī)模高效率的噬菌體篩選工作,亟需一種高通量的噬菌體篩選方案,在不降低篩出率的前提下,提高噬菌體分離液的利用效率,從而提高噬菌體的篩選通量。
  本種處理方法,針對傳統(tǒng)方法中所存在的種種問題,開創(chuàng)了一種全新的思路。它與傳統(tǒng)方法相比,具有以下優(yōu)點:
  1.通過微球包被后凍干的方法可延長目標菌株的保存時間,一次處理后可大量儲存于-20℃的環(huán)境中,每次操作時直接取出后使用即可,大大簡化了操作步驟,提高篩選效率;
  2.通過微球包被后的目標菌株,被固定于海藻酸鈣凝膠網(wǎng)絡(luò)中,可通過濃縮菌液的方法,提高微球中目標菌株的濃度,從而提高單位空間中的細菌數(shù)量,增大細菌與噬菌體顆粒的接觸概率,提高篩出率;
  3.通過本方法可針對同一批次的噬菌體分離原液,進行多株目標菌株的篩選,提高原液的利用率同時,還可以大大簡化操作步驟;
  4.經(jīng)富集處理后的微球后可再次經(jīng)冷凍干燥處理,增加富集后微球的保存時間,可將多批次富集后微球一起處理,簡化操作同時提高效率。
  綜上所述,可以說本方法具備了多種優(yōu)點,特別適合于在本領(lǐng)域中推廣應(yīng)用,其市場前景十分廣闊。

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