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固相萃取10大秘訣

來源:北京亙辰科技有限公司   2021年06月10日 12:06  

 

固相萃取10大秘訣

北京亙辰科技有限公司(如需轉(zhuǎn)載,請聯(lián)系我們

1. 了解你的化合物! ?

被分析化合物的特性對可以執(zhí)行的SPE類型有很大影響(請查閱我們的SPE指南,聯(lián)系北京亙辰科技索要資料)。兩個最重要的值是目標(biāo)分析物的pKaLog P:?
pKa = 分析物一半電離一半未電離的點。
Log P = 化合物疏水性的量度。

2. 優(yōu)化上樣pH ?

pH 值對任何SPE方法都有很大影響,可用于優(yōu)化化合物在SPE產(chǎn)品上的保留。
例如,反相方法調(diào)節(jié)pH值以中和分析物上的任何電荷。
這將使它們更具疏水性,提高與樹脂的相互作用。對于酸性化合物,將pH值調(diào)節(jié)2個單位低于pKa;對于堿性化合物,將pH值調(diào)節(jié)2個單位高于pKa。
 
3. 優(yōu)化洗滌和洗脫強(qiáng)度
當(dāng)時用混合模式或反相SPE產(chǎn)品時,可以調(diào)整洗滌和洗脫強(qiáng)度,以獲得最
干凈的提取物。Log P是一個很好的屬性,可幫助您決定如何設(shè)置。
Log P-在洗滌步驟中使用更強(qiáng)的有機(jī)強(qiáng)度。
Log P-降低洗脫溶劑的有機(jī)強(qiáng)度,以抑制疏水干擾,同時仍能洗脫所選分析物。
 
 4.  新鮮的標(biāo)準(zhǔn)是*!
一些分析物很容易因熱和光而降解,并且在長期存儲時會從溶液中沉淀出來。這將影響校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)和回收率值。在開始之前,請使用新制定的標(biāo)準(zhǔn)開始您的程序。
 
5. 了解你的吸附劑! ?
找出您正在使用的吸附劑的pKa,并將其與您的分析物pKa一起使用,在上樣和洗滌步驟中調(diào)節(jié)溶液的pH值,無需去離子化合物和樹脂(僅限弱離子樹脂)。?
 
6. 吸附劑調(diào)節(jié)
既然您知道了吸附劑的pKa(步驟5),您的吸附劑床就可以被激活并準(zhǔn)備好通過調(diào)節(jié)來結(jié)合分析物。在大多數(shù)基于硅膠的SPE吸附劑中,硅膠與官能化部分鍵合,該部分通常平放在顆粒表面。
 
調(diào)節(jié)步驟(使用與水混溶的有機(jī)溶劑,例如MeOH)使這些鍵合的官能團(tuán)“豎立”在顆粒的頂部,為它們提供最大的表面積,讓感興趣的分析物相互作用/結(jié)合。如果吸附劑是水可濕性的,則可能不需要此步驟,但它可以通過對吸附劑床進(jìn)行溶劑洗滌來提高提取物的清潔度。
 
7. 順其自然(流速)
流速對于成功的反相SPE工作流程很重要。保留機(jī)制在很大程度上依賴于吸附劑和目標(biāo)分析物之間相互作用的范德華力。SPE過程中的快速流速會降低目標(biāo)分析物與吸附劑介質(zhì)正確結(jié)合的能力,并可能導(dǎo)致SPE方法的上樣和洗滌步驟出現(xiàn)突破。緩慢而穩(wěn)定的樣品流為最佳。以小于或等于每秒1滴(~1毫升/分鐘)的流速為目標(biāo)。
 
8.松散包裝與復(fù)合
松散填充的材料會對吸附劑床造成許多問題,包括溝流、壓縮、空隙以及由于松散填充后頂部玻璃料缺乏壓縮而導(dǎo)致的床重與床高比差異的不一致(圖1.)。所有這些因素都會對測試的回收率和再現(xiàn)性產(chǎn)生負(fù)面影響??紤]Microlute@ CP系列這樣的復(fù)合產(chǎn)品,這些產(chǎn)品旨在消除這些問題并提高SPE方法的回收率和重現(xiàn)性。
Figure 1. MicroluteTM CP, 復(fù)合吸附劑與傳統(tǒng)松散填充SPE
 
9. 洗脫前干燥SPE樹脂
二氧化硅在干燥時非常容易受到固定相塌陷的影響。在完成SPE程序的最
后洗滌步驟之前,不要讓二氧化硅基樹脂在任何時候變干——在上樣步驟
中尤其如此。這通過限制分析物和鍵合相之間可能的相互作用來防止回收
率降低。
以下提示適用于聚合物樹脂和二氧化硅樹脂:
  • 執(zhí)行清潔步驟后,確保使用真空或正壓干燥樹脂,直到樹脂*干燥(我們建議使用正壓/真空至少3分鐘)或直到看不到清洗溶劑。
  • 如果您的方法需要干燥和重構(gòu)步驟,干燥樹脂會顯著縮短干燥時間,大多數(shù)洗滌溶劑中都存在水,水比大多數(shù)有機(jī)溶劑更難蒸發(fā)。
  • 如果您的方法不需要干燥步驟,則在洗滌步驟后不干燥SPE樹脂會導(dǎo)致最終進(jìn)樣溶液的濃度降低,從而導(dǎo)致靈敏度降低。
 
10.   最佳干燥
確保您的干燥方法足夠有力以明顯擾亂洗脫溶劑的表面,但不至于導(dǎo)致將溶液從孔中排出的可能性,因為這會導(dǎo)致嚴(yán)重的RSD%和回收率差異。
這可能非常困難,因為溶劑水平會在干燥過程中移動。為了克服這個問題,使用可以編程或自動調(diào)整以實現(xiàn)高效溶劑蒸發(fā)的蒸發(fā)器,例如Porvair Sciences Ultravap@系列蒸發(fā)器,它可以在整個過程的所有階段優(yōu)化干燥,而沒有任何樣品污染的風(fēng)險。
 
 

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