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Advanced 系列高效 DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑操作說明
產(chǎn)品名稱
Advanced DNA RNA Transfection Reagent
包裝規(guī)格
1.產(chǎn)品貨號：AD600025、AD600050、AD600075、AD600100、AD600150、AD600300；
2.規(guī)格：0.25ml、0.5ml、0.75ml、1ml、1.5ml、3ml；
儲存條件
常溫運輸，4℃保存，可保存兩年，拒絕反復(fù)凍融。
材料準(zhǔn)備
1.RNA 濃度 20 uM /L。
2.質(zhì)粒 DNA 濃度 300 ng-2 ug/ul（注意：①溶解于無菌雙蒸水或超純水；②無內(nèi)毒素 ）。
操作步驟
1.提前 1 天接種細(xì)胞：細(xì)胞匯合度在 60-80%左右，再進行轉(zhuǎn)染。
2. 核酸復(fù)合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混勻，室溫靜止 10-15 分鐘。
3.在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入核酸復(fù)合物：根據(jù)參考用量在細(xì)胞中加入核酸復(fù)合物，并輕輕混勻；細(xì)胞培養(yǎng)基里面可以含有血清。
4.細(xì)胞換液：轉(zhuǎn)染 24 小時后對細(xì)胞進行正常換液，懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液。
5.分析結(jié)果：質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，48-96 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。若進行穩(wěn)定表達細(xì)胞株的篩選，則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9小時熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，48-72 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。
注意事項
? 1、質(zhì)粒 DNA 必須溶解于無菌雙蒸水或超純水，但不能溶解于提取試劑盒提供的 Buffer。溶解于 Buffer的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率會下降 80%左右，甚至?xí)D(zhuǎn)染失敗。
? 2、質(zhì)粒必須去除內(nèi)毒素，內(nèi)毒素對細(xì)胞將產(chǎn)生很大的細(xì)胞毒性，會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率下降 70%-80%左右，甚至導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失?。ㄍ扑]使用 Qiagen、TIANGEN、Omega 去內(nèi)毒素質(zhì)粒提取試劑盒）。
? 3、復(fù)合物的制備過程中是絕對不能用其他任何試劑對核酸或轉(zhuǎn)染試劑進行稀釋，只需將核酸和轉(zhuǎn)染試劑兩者按 1:1 比例直接混合，如果進行了稀釋會導(dǎo)致轉(zhuǎn)染失。
? 4、轉(zhuǎn)染試劑與核酸混勻后用移液器吹打 10-15 次，室溫孵育 10-15 分鐘后即可加入細(xì)胞培養(yǎng)板。
? 5、轉(zhuǎn)染 24 小時后進行正常換液，不能像 Lipo2000 一樣轉(zhuǎn)染 4-6 小時后換液。
? 6、原代細(xì)胞、免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染時，細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基里面不能含有雙抗培養(yǎng)基。
轉(zhuǎn)染操作示意圖
不同轉(zhuǎn)染實驗各成分推薦用量
僅供科學(xué)研究使用，禁止用于它用
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