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微生物菌種凍干工藝流程

來源:蓓迪(北京)科技有限公司   2021年07月08日 09:22  

微生物的保存方法很多,根據不同的微生物菌(毒)株或不同的實驗要求,可選用不同的保存方法,其中常見的有斜面保存法,穿刺保存法、液體石蠟保藏法、沙土管保存法、冷凍保存法、真空冷凍干燥保存法。其中真空冷凍干燥保存法方便復活、保存期長,運輸和保存方便,活菌率高。

冷凍干燥是將菌體懸浮液冷凍到冰點以下,從而轉變?yōu)楣腆w結晶態(tài),然后在低溫低壓(真空)下使固體升華而脫水的干燥方法。一般干燥處理過程會破壞微生物的細胞膜,引起細胞的大量死亡,因此需要添加保護劑,能夠使菌液密度均一,減少活菌在凍干過程中的機械效應和溶質效應帶來的死亡。因此,在凍干前加入的保護劑配方就成為了至關重要的決定性因素,它既會影響到儲存期細胞的活性以及穩(wěn)定性,也會影響到復水時細胞存活率。

     凍干法是長期保存細菌、酵母、真菌、病毒和立克次氏體的標準方法(在凍干前一般要加冷凍保護劑,這樣可使細胞免除在冷凍初期因形成冰晶而造成的損害。ATCC 常規(guī)用10%脫脂奶或12%蔗糖作為冷凍保護劑,而美國農業(yè)部(USDA)的農業(yè)研究服務機構的實驗人員用?;蝰R血清作為微生物的冷凍保護劑(。在菌液中加入甘油和二甲亞砜(DMSO)也可防止冷凍中微生物的死亡,但實際操作中應根據不同微生物決定應用或不用保護劑
    真空冷凍干燥法保存菌種的步驟主要包括:

1、微生物培養(yǎng),培養(yǎng)獲得健壯的菌種擴培液體。培養(yǎng)時根據菌種選擇不同的培養(yǎng)基。培養(yǎng)到對數期獲得大量健壯的菌種,保證菌體濃度,一般達到109的濃度.

2、離心收集菌體。通過離心法從液體培養(yǎng)基中獲得菌體。如果是固體培養(yǎng)基可以直接收集菌落,用保護劑溶解混勻。

3、將菌體、脫脂奶粉、海藻糖、蔗糖等保護劑在無菌水中混勻得到含有保護劑的菌體混懸液。

4、分裝。將菌體混懸液在無菌環(huán)境中分裝到無菌容器中,可以是安瓿瓶、西林瓶、EP、培養(yǎng)皿等。

5、預凍,預凍是非常關鍵的。預凍不好,菌體會死亡。要快速預凍,防止產生大冰晶造成細胞死亡。預凍要凍結實,保證預凍充分。

6、將預凍好的菌體,放入真空冷凍干燥設備中進行凍干。如果是設備帶預凍功能,也可以直接在凍干機上進行預凍。真空冷凍干燥時間和凍干曲線的 設計要根據菌種的不同和菌體混懸液的濃度等進行設計。凍干好后真空密封保存。

   微生物凍干法采用的凍干設備可以有多種選擇,從實驗室凍干機到研發(fā)型凍干機都可以適用。如以下系列凍干機都可以用來凍干保存微生物。

型號

Pilot2-4L

Pilot2-4M

Pilot2-4H

凍干面積

0.2

0.2

0.2

冷阱溫度(空載)

-55℃

-85℃

-85℃

真空度(空載)

<6Pa

≤1Pa

≤1Pa

板層尺寸(mm

375*270

 

 

板層溫度(空載)

-40℃

-55℃

-55℃

板層制冷方式

硅油循環(huán)

硅油循環(huán)

硅油循環(huán)

箱阱結構

箱阱一體式

箱阱一體式

箱阱分離式

捕水能力

4L

4L

4L

凍干效率

3L/24H

3L/24H

3L/24H

板層間距

80mm

80mm

80mm

壓塞

手動

手動

手動

壓縮機功率

7/8HP

2*7/8HP

2*7/8HP

真空泵

2L/S

 

 

整機尺寸
(約)

W660*D850*H1440

W660*D850*H1440

W660*D960*H1440

 

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