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色譜柱度優(yōu)化功能，或“GO”功能，把線性梯度轉(zhuǎn)化成階梯梯度，在已確認(rèn)的洗脫峰附近，優(yōu)化洗脫條件。先用一個(gè)小的色譜柱純化一個(gè)小部分樣品，一旦運(yùn)行完畢，選擇優(yōu)化按鈕。然后選擇目標(biāo)峰，一個(gè)新的，優(yōu)化了的，基于梯度洗脫方法就自動(dòng)產(chǎn)生了。選擇一個(gè)新的色譜柱和收集支架，分離方法就根據(jù)新柱子的大小自動(dòng)調(diào)整， 并準(zhǔn)備運(yùn)行。
色譜柱污染后的清洗和再生：
當(dāng)柱子被污染，它的色譜行為和沒(méi)被污染的柱子會(huì)有些不同。被污染的柱子能產(chǎn)生反壓?jiǎn)栴}。被污染的反相柱子必須清洗和再生才能恢復(fù)原來(lái)的操作條件。
再生被污染HPLC柱子的關(guān)鍵是知道污染物的性質(zhì)并且能找到適當(dāng)?shù)娜軇﹣?lái)去除。如果污染是因?yàn)橹貜?fù)進(jìn)樣時(shí)強(qiáng)保留物質(zhì)的累積引起的，利用簡(jiǎn)單的步驟來(lái)除去這些污染物往往能恢復(fù)其色譜行為。有時(shí)候，經(jīng)過(guò)多次操作以后的色譜柱用90～100%的溶劑B(雙溶劑反相系統(tǒng)中較強(qiáng)的溶劑)沖洗20個(gè)體積可以**污染物。例如，柱子中殘留的脂質(zhì)就能用非水溶劑如甲醇、乙晴、四氫呋喃。
一般來(lái)說(shuō)，所有的清洗方法都有類似的形式。所用的溶劑都是隨溶劑強(qiáng)度增加，經(jīng)常*后一個(gè)溶劑是非常疏水的(如醋酸乙酯甚至是烴)，可以用來(lái)溶解非極性物質(zhì)如脂質(zhì)和油類。我們必須保證一系列溶劑中每個(gè)溶劑都能與下一個(gè)溶劑互混。清洗過(guò)程要結(jié)束時(shí)，必須借助一個(gè)中等強(qiáng)度能互混的溶劑而回到原始溶劑系統(tǒng)。例如，異丙醇是一個(gè)非常好的作為中間步驟的溶劑，因?yàn)樗芘c正己烷或二氯甲烷互溶又能與水相溶劑互溶。但是異丙醇粘度非常大，必須確保較低的流速以免使泵壓過(guò)高。沖洗色譜柱時(shí)，沖洗液由色譜柱出液端直接接入廢液瓶，不能流經(jīng)檢測(cè)池，以**測(cè)池被污染。
反相色譜柱沒(méi)有使用緩沖溶液，請(qǐng)使用以下溶劑系列再生：
100%甲醇→100%乙腈→75%乙腈-25%異丙醇→100%異丙醇→100%二氯甲烷→100%正己烷→100%二氯甲烷→100%異丙醇→100%乙腈。
反相色譜柱使用緩沖溶液，請(qǐng)使用以下溶劑系列再生：
水→乙腈→氯仿(或異丙醇)→乙腈→水。
表 用來(lái)沖洗的溶劑體積、時(shí)間
色譜柱尺寸 柱體積 所用溶劑的體積 沖洗時(shí)間
150-4.6 2.5ml 50ml 50min
250-4.6 4.2ml 80ml 80min
每種溶劑至少?zèng)_洗20個(gè)柱體積。如250mm×4.6mmHPLC分析柱，可以用1ml/min的流速來(lái)沖洗，沖洗后使用沒(méi)有緩沖的流動(dòng)相進(jìn)行平衡色譜柱。
注：如果簡(jiǎn)單的有機(jī)溶劑/水的處理不能夠*洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì)，說(shuō)明色譜柱嚴(yán)重污染，沖洗溶劑可以用①0.05M稀硫酸，②二甲基亞砜(DMSO)，③二甲基甲酰銨-水(50：50)，用低于0.5ml/min的流速?zèng)_洗非常有效。
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