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KlenTaq1說明書

來源:上海起發(fā)實驗試劑有限公司   2021年07月13日 15:15  

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KlenTaq1說明書

KlenTaq1是一種熱穩(wěn)定性 DNA 聚合酶,由基因的 5' 缺失表達,編碼 Thermus Aquaticus DNA 聚合酶,留下高活性甚至更耐熱的 DNA 聚合酶活性。在反應緩沖液 PC2 中反復暴露于 980°C 似乎不會降低酶活性。即使暴露于 990°C 后仍保持顯著活性。全長酶不能耐受這些處理。              


  所述   KlenTaq1 ™酶缺少野生型全長Taq DNA聚合酶的N-末端部分。這部分蛋白質與大腸桿菌 DNA 聚合酶 1 的 5' – 核酸外切酶區(qū)域同源。  因此,KlenTaq1 ™ 與 Hoffman LaRoche 的 Stoffel 片段相似但又不同。           


     對于KlenTaq1不含甘油(目錄號1001 NGKT):儲存酶,并于4℃下的緩沖液中。儲存緩沖液為 50 mM 硫酸銨、20 mM Tris-HCl pH 8.55、0.1 mM EDTA、10 mM 巰基乙醇、無明膠和 0.5% Thesit。               

對于50% 甘油中的KlenTaq1 (貨號 1001):將酶儲存在 -200°C,將緩沖液儲存在 40°C。儲存緩沖液中的甘油可防止在 -20°C 下凍結,但 Thesit 在此溫度下會導致一些增稠。它是可選的,但建議在分配前在冰上加熱至 0°C。對于長期儲存,可以采用 -70°C 或 -80°C,但我們建議酶不要冷凍超過一次。重新冷凍和解凍會導致酶活性降低。儲存緩沖液為 50% 甘油 (v/v; 63% w/v)、50 mM 硫酸銨、20 mM Tris-HCl pH 8.55、0.1 mM EDTA、10 mM 巰基乙醇、無明膠和 0.5% Thesit。               

  濃度:5 個  KlenTaq1™單位(72°C 下 30 分鐘內摻入 60 nmole)?;罨孽q魚精z DNA 是模板;PC2(見下文)是緩沖區(qū)。注意,這些單位比標準單位大 6 倍。以標準單位(10 nmole/30 分鐘)計算,此處的酶濃度約為 30 單位/毫升。                   

盡管該酶在各種條件下都能很好地發(fā)揮作用,但推薦的反應緩沖液 PC2 是:50 mM Tris-HCl pH 9.1、16 mM 硫酸銨、3.5 mM MgCl2 和 150 mg/ml BSA(隨訂單提供) . 請注意,與熱穩(wěn)定 DNA 聚合酶的其他緩沖液相比,不含 KC1 和明膠。dNTP 濃度可以從每個 50 µM 到每個 1.2 mM,但通常使用 200 µM。如果 DNA 摻入超過 500 bp,您將需要比 Taq 蛋白更多的KlenTaq1™蛋白。如果使用與全長 Taq DNA 聚合酶相同的量(羅氏推薦),KlenTaq1™ 以 25-30 u/µl 的濃度運輸,因此它可以輕松整合 2000 bp。
                   

 1 DNA 摻入單位 = 10 nmoles / 30 min='標準單位'。羅氏的酶每微升含有 5 個“標準單位”。KlenTaq1™每微升含有 25-30 個“標準單位”。               

      羅氏建議每 100 微升反應使用 0.5 微升;也就是說,1 微升將催化 2 個反應。進行反應所需的KlenTaq1™量取決于摻入的長度。對于KlenTaq1™ ,在 100 微升反應中,1 微升將催化 15-20 次 500 bp 反應和 8-10 次 1 kb 反應和 3-5 次 2kb 模板 DNA 反應。由于過量的 KlenTaq1™ 是無害的,我們保守地建議每次反應使用 0.50 微升,以確保最大 2.5 kb 的所有物質都有效。這就是我們檢查和滴定酶的方法。


參考巴恩斯,WM,基因,卷。112,第 29-35 頁,1992 年。巴恩斯,WM,PNAS,卷。19,第 2216-2220 頁,1994 年 3 月。Baskaran, N. 等,基因組研究,卷。6,第 633-638 頁,1996 年。
NB 對于KlenTaq1不含甘油(目錄號1001 NGKT):儲存酶,并于4℃下的緩沖液中。  對于50% 甘油中的KlenTaq1 (目錄號 1001):將酶儲存在 -200°C,將緩沖液儲存在 40°C。

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