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甲型肝炎疫苗血清?制備方法

來源:上海谷研實業(yè)有限公司   2021年07月15日 14:47  

甲型肝炎疫苗血清制備方法:

此法用于制備間接法抗抗體。因抗原為可溶性,故多需加佐劑。

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(1)淋巴結注射法

1)選擇體重2~3Kg的健康雄性家兔( 2只以上),編號;

2)在家兔兩后腳掌共注射活卡介苗,50mg(約0.6mL.每只足庶部皮下0.1mL,皮內0.2mL)。7~10d后,鼠或國窩處淋巴結腫大如黃豆或蠶豆大小;

3)用二指固定腫大之淋巴結,兩側淋巴結各注射加有*佐劑的抗原o.5mL,共1mL。事先將抗原稀釋為 5~10mg/ml,在免疫前一日加入青、鏈霉素,使青、鏈霉素的濃度分別為1000U/mL和1000mg/mL。4℃,次日取出與佐劑混合成乳劑。許多單位用兩個注射器分別吸取佐劑與抗原,中間用細膠管連接,相互推進若干次,達到乳化目的;

4)10~14d后,于兩側淋巴結各注射加有*佐劑的抗原0.25~0.5mL(這一次也可以省略);

5)7d后,于兩側淋巴結各注射加有不*佐劑的抗原0.25~0.5mL;

6)試血:第三次免疫后7~10d,耳靜脈取少量血,分離血清,用雙擴散法,中間孔加抗原(1mg/mL),周圍孔加不同稀釋度的待檢抗血清,37℃、 24h,觀察結果,效價在1︰16以上,或者中間孔加抗血清,周圍孔加不同稀釋倍數的抗原。效價達4000倍以上即可應用;

7)放血:效價合格后即可放血。放血前停食12h。動物仰臥固定,頸部剪毛消毒,切開皮膚lOcm,找到頸動脈,將頸動脈和迷走神經剝離。選擇血管中段,用兩止血鉗夾?。s 5cm),切開,放血(2500g重家兔可放血lOOmL);

8)分離血清:血液放于大試管、平皿或三角瓶中,凝固后,用鉑耳或無菌滴管沿邊緣剝離,先故37122h,再放4℃,使血清充分析出。離心沉淀,鑒定合格,冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

RA, 大鼠星形膠質細胞

RLF, 大鼠淋巴成纖維細胞

rRTEC, 大鼠腎小管上皮細胞

rCSC, 大鼠心肌細胞

RDFs, 大鼠真皮成纖維細胞

RLFs, 大鼠肺成纖維細胞

rCF, 大鼠心臟成纖維細胞

 細胞名稱

MN-h, 小鼠海馬神經元

MN-s, 小鼠紋狀體神經元

mOPC, 小鼠少突膠質前體細胞

MA, 小鼠星形膠質細胞

MLF, 小鼠淋巴成纖維細胞

mRTEC, 小鼠腎小管上皮細胞

CSC, 小鼠心肌細胞

小鼠骨髓間充質干細胞(BMSCs)

MEF, 小鼠胚胎成纖維細胞

MM, 小鼠小膠質細胞

mCF, 小鼠心臟成纖維細胞


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