上海琛藝實業(yè)有限公司經(jīng)過數(shù)年的努力發(fā)展已迅速成為集產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、經(jīng)營為一體的專業(yè)化生物工程公司。公司新引進細胞上千株，其中人的已通過STR鑒定的有幾百株，歡迎各位選購。。。。。。

細胞名稱：NRK    大鼠腎細胞

組織來源：腎；正常

培養(yǎng)條件：DMEM +10% FBS

形       態(tài)：貼壁；上皮細胞樣

背       景：該細胞源于Osborne-Mendel大鼠的正常腎組織。

NRK(大鼠腎細胞)“一代”指從細胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間，與細胞世代或倍增不同。在一代中，細胞培增3～6次。細胞傳代后，一般經(jīng)過三個階段：游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細胞分裂指數(shù)表示細胞增殖的旺盛程度，即細胞群的分裂相數(shù)／100個細胞。一般細胞分裂指數(shù)介于0.2％～0.5％，腫瘤細胞可達3～5％。接種2～3天分裂增殖旺盛，是活力zui好時期，稱指數(shù)增生期(對數(shù)生長期)，適宜進行各種試驗。

formazan結(jié)晶的生成量僅與活細胞數(shù)目成正比（死細胞中琥珀酸脫氫酶消失，不能將MTT還原）。還原生成的formazan結(jié)晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶標儀測定490 nm處的光密度OD值，以反映出活細胞數(shù)目。也可以用DMSO來溶解。MTT粉末和溶液保存時都需要避光，用鋁箔紙包好就可以。實驗的時候一般關(guān)閉超凈臺上的日光燈來避光，覺得這樣比較好。

目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由冰晶形成的細胞損傷。
1、10%的DMSO+90%胎牛血清。甘油一般用于菌種保存很少用于細胞凍存。
2、取對數(shù)生長期的細胞，用胰蛋白酶把單層生長的細胞消化下來，懸浮生長的細胞則直接將細胞移至15ml離心管中。
3、離心1000 rpm,5 min。
4、去除胰蛋白酶及舊的培養(yǎng)液，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細胞的zui終密度為5x10^6/ml~1x10^7/ml。
5、 在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者。
6、凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/min；當溫度達到-25℃以下時，可增至-5℃~-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。

1.接種：用含10％胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個細胞懸液，以每孔1000－10000個接種到96孔板，每孔體積200ul.

2細胞培養(yǎng)：同一般培養(yǎng)條件，培養(yǎng)3－5天（可根據(jù)試驗目的和要求決定培養(yǎng)時間）。

3.呈色：培養(yǎng)3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul.

繼續(xù)孵育4小時，終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，對于懸浮需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO，振蕩10分鐘，使結(jié)晶物充分融解。

購買上海琛藝細胞注意事項發(fā)布
　　一、客戶收到細胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；
　　收到細胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。
　　二、如為貼壁細胞，請在顯微鏡下觀察細胞密度：
　　1.  未超過80%匯合度時，用75%酒精（建議配置75%酒精的水也是滅菌超純水，噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴格無菌操作；然后打開蓋子，先用槍頭把培養(yǎng)基吸出10ml左右，放在離心管里，然后瓶口過火（嚴禁直接傾倒），這樣可以保證不污染，再用10ml的移液管，將剩余的培液全部吸出，放于離心管中，培養(yǎng)瓶中只剩余10ml左右培液就可以了。培養(yǎng)16hr(時間根據(jù)細胞生長情況調(diào)整）之后，傳代或者凍存。
　　2. 超過80%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：
　　1) 棄去培養(yǎng)液，用3ml PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次；
　　2) 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM  EDTA）于T25培養(yǎng)瓶中，倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預熱，然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶，細胞隨即脫落下來；
　　3) 加入6-8ml*培養(yǎng)基，吸出，分到新的培養(yǎng)瓶中，按要求分瓶。
　　三、如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
　　注意：換液時一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的，以免細胞不適應而造成生長不好。