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NRK 大鼠腎細胞

來源:上海琛藝實業(yè)有限公司   2021年07月18日 14:49  

上海琛藝實業(yè)有限公司經(jīng)過數(shù)年的努力發(fā)展已迅速成為集產(chǎn)品研發(fā)、生產(chǎn)、經(jīng)營為一體的專業(yè)化生物工程公司。公司新引進細胞上千株,其中人的已通過STR鑒定的有幾百株,歡迎各位選購。。。。。。

細胞名稱:NRK    大鼠腎細胞

組織來源:腎;正常

培養(yǎng)條件:DMEM +10% FBS

      態(tài):貼壁;上皮細胞樣

      景:該細胞源于Osborne-Mendel大鼠的正常腎組織。

NRK(大鼠腎細胞)一代指從細胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間,與細胞世代或倍增不同。在一代中,細胞培增36次。細胞傳代后,一般經(jīng)過三個階段:游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細胞分裂指數(shù)表示細胞增殖的旺盛程度,即細胞群的分裂相數(shù)/100個細胞。一般細胞分裂指數(shù)介于0.2%~0.5%,腫瘤細胞可達35%。接種23天分裂增殖旺盛,是活力zui好時期,稱指數(shù)增生期(對數(shù)生長期),適宜進行各種試驗。

formazan結(jié)晶的生成量僅與活細胞數(shù)目成正比(死細胞中琥珀酸脫氫酶消失,不能將MTT還原)。還原生成的formazan結(jié)晶可在含50%N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉(pH 4.7)的MTT溶解液中溶解,利用酶標儀測定490 nm處的光密度OD值,以反映出活細胞數(shù)目。也可以用DMSO來溶解。MTT粉末和溶液保存時都需要避光,用鋁箔紙包好就可以。實驗的時候一般關閉超凈臺上的日光燈來避光,覺得這樣比較好。

目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外,減少細胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由冰晶形成的細胞損傷。
1
、10%DMSO+90%胎牛血清。甘油一般用于菌種保存很少用于細胞凍存。
2
、取對數(shù)生長期的細胞,用胰蛋白酶把單層生長的細胞消化下來,懸浮生長的細胞則直接將細胞移至15ml離心管中。
3
、離心1000 rpm,5 min。
4
、去除胰蛋白酶及舊的培養(yǎng)液,加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,用吸管輕輕吹打使細胞均勻,計數(shù),調(diào)節(jié)凍存液中細胞的zui終密度為5x10^6/ml~1x10^7/ml。
5
、 在凍存管上標明細胞的名稱,凍存時間及操作者。
6
、凍存:標準的凍存程序為降溫速率-1~-2/min;當溫度達到-25℃以下時,可增至-5~-10/min;到-100℃時,則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h,然后放入-70℃冰箱中過夜,取出凍存管,移入液氮容器內(nèi)。

1.接種:用含10%胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個細胞懸液,以每孔100010000個接種到96孔板,每孔體積200ul.

2細胞培養(yǎng):同一般培養(yǎng)條件,培養(yǎng)35天(可根據(jù)試驗目的和要求決定培養(yǎng)時間)。

3.呈色:培養(yǎng)35天后,每孔加MTT溶液(5mg/mlPBS )20ul.

繼續(xù)孵育4小時,終止培養(yǎng),小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液,對于懸浮需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO,振蕩10分鐘,使結(jié)晶物充分融解。

購買上海琛藝細胞注意事項發(fā)布
  一、客戶收到細胞先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;
  收到細胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。
  二、如為貼壁細胞,請在顯微鏡下觀察細胞密度:
  1.  未超過80%匯合度時,用75%酒精(建議配置75%酒精的水也是滅菌超純水,噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi),嚴格無菌操作;然后打開蓋子,先用槍頭把培養(yǎng)基吸出10ml左右,放在離心管里,然后瓶口過火(嚴禁直接傾倒),這樣可以保證不污染,再用10ml的移液管,將剩余的培液全部吸出,放于離心管中,培養(yǎng)瓶中只剩余10ml左右培液就可以了。培養(yǎng)16hr(時間根據(jù)細胞生長情況調(diào)整)之后,傳代或者凍存。
  2. 超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。具體步驟如下:
  1) 棄去培養(yǎng)液,用3ml PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次;
  2) 1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM  EDTA)于T25培養(yǎng)瓶中,倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預熱,然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后,在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓分散,輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶,細胞隨即脫落下來;
  3) 加入6-8ml*培養(yǎng)基,吸出,分到新的培養(yǎng)瓶中,按要求分瓶。
  三、如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液,1000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
  注意:換液時一半用我們的培養(yǎng)基,一半用你們的,以免細胞不適應而造成生長不好。

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