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近做實驗不順利，經(jīng)常得不到目標(biāo)蛋白，要么就是蛋白損失很大。怎么辦呢？
由于超濾管使用不恰當(dāng)或是超濾知識缺乏引起的問題，簡直成了實驗汪們蛋白實驗不成功、效率低下的常見原因之一。比如說：
為什么我截留分子量選擇沒錯，蛋白有時候卻會漏出在濾出液中？ | |||||||||||||
為什么我用濃縮后的蛋白做下游分析的時候發(fā)現(xiàn)有干擾？ | |||||||||||||
用超濾管來分離兩種蛋白可以嗎？ | |||||||||||||
有時候我用超濾離心管連水都離不下來，可能的原因是？ | |||||||||||||
超濾管可以用來脫鹽和濃縮核酸嗎？ | |||||||||||||
如何給超濾管滅菌？
于是，膜過濾和超濾專家專門寫了一篇攻略，幫助實驗小白們成功在通往技術(shù)大牛的道路上打怪升級。 廢話不多說，上干貨，小板凳搬好了哦！ 我們先來看看重點問題怎么解決 Q 為什么我截留分子量選擇沒錯， A 導(dǎo)致漏蛋白甚至檢測不到蛋白的原因很復(fù)雜，應(yīng)優(yōu)先根據(jù)樣品調(diào)整工藝，因為同一種膜、截留分子量和裝置組合對于不同的蛋白質(zhì)類別甚至物種而言可能并非優(yōu)之選。 在選擇過程中，應(yīng)先執(zhí)行以下步驟：
Q 為什么我用濃縮后的蛋白 A 超過濾薄膜含有微量甘油。如果此材料干擾分析，可用緩沖液或去離子水預(yù)清洗。如果干擾仍然存在，用 0.1 N NaOH 清洗，然后用緩沖液或去離子水再次清洗后甩干。如果必須用NaOH處理的時候，推薦試用聚醚砜（PES）膜，因為比（再生纖維素）RC膜更耐NaOH，同時提醒NaOH不能過夜浸泡。 Q 用超濾管來分離兩種蛋白可以嗎？ A 因為超濾膜的孔徑不是規(guī)則的結(jié)構(gòu)，所以不能進(jìn)行精確的分離，所以按照經(jīng)驗，我們推薦兩個蛋白的分子量要相差一個數(shù)量級（10倍）以上才可以進(jìn)行分離。另外，賽多利斯的300k，1000k和0.2um的超濾管可以實現(xiàn)10倍以上分子量差異的蛋白粗分離。 |
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