基本原理
熒光:是一種非溫度輻射冷光,據發(fā)生性質可分為光化熒光(由特定光源光譜激發(fā)而產生的熒光)、放射熒光(放射性物質激發(fā))、生物熒光(生物體發(fā)出)、化學熒光(如磷氧化時)等。
熒光現(xiàn)象:某物質在受到某種特定波長的高能量光(短波長)照射后獲取能量,幾乎即時(約在10~15s后)其分子內的電子躍遷到較高能級軌道使分子進入激發(fā)態(tài),激發(fā)態(tài)的分子不通過內部轉換方式消耗能量回到基態(tài),而是釋放出相應較低能量的光量子→人眼可見的熒光(較長波長)。
熒光現(xiàn)象有兩種:一次熒光現(xiàn)象,又稱“固有熒光”或“自發(fā)熒光”,是指經照射后,就能發(fā)出熒光的物質,此類物質的化學特征是發(fā)光分子具有共軛雙鍵,π電子活動性大。二次熒光現(xiàn)象,又稱“繼發(fā)熒光”,物質經照射后不能或只能部分發(fā)生微弱的熒光,這樣就需先用熒光色素(或稱熒光染料、熒光探針)標記處理,將熒光色素標記結合插入到不發(fā)光的活性分子中去,再經照射才能發(fā)生熒光。熒光色素應具備的基本條件是能與不發(fā)光分子的某個區(qū)域有特異性的牢固結合,同時不會影響被結合分子的結構和特性,光量子效率應≥013。
熒光的產生包含了激發(fā)和發(fā)射兩個過程,激發(fā)光譜短于發(fā)射光譜,故光色不同。而不同的熒光物質或熒光色素有其最敏感而有效的激發(fā)波長,因此選擇合適的激發(fā)/發(fā)射光譜以獲得最佳的熒光鏡像質量是實驗中要首先考慮的。
熒光顯微鏡是利用“光化熒光”成像,如果所選激發(fā)波長在肉眼所看不見的近紫外光區(qū)(320~400nm),熒光的發(fā)射光譜也較普通光鏡光源的平均波長短,光學分辨率提高。
OLYMPUS熒光顯微鏡使用方法:
(1)先關閉熒光通道,再打開熒光激發(fā)器電源,等待15分鐘。
(2)等待期間,打開顯微鏡光源,找到需要觀察的樣品,選用合適的物鏡,調整焦距。
(3)關閉顯微鏡光源,打開熒光通道。
(4)需要圖片,要把鏡體上的相應拉桿拉到綠線位子。按下相應附件上的照相按扭。
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