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篩選穩(wěn)定細(xì)胞株的兩種方法：
1.單克隆環(huán)法主要用于整合率低的轉(zhuǎn)染法以及獲得單克隆細(xì)胞株。單克隆環(huán)法具有工作量小的優(yōu)點(diǎn)，只要把轉(zhuǎn)染體細(xì)胞按一定的細(xì)胞密度放入新的培養(yǎng)皿，用合適的藥物篩選并在培養(yǎng)皿中進(jìn)行擴(kuò)增，適合少量勞動(dòng)力作業(yè)，其劣勢(shì)可能難以獲得高產(chǎn)率的穩(wěn)定株。
2.逆轉(zhuǎn)錄病毒的混合克隆技術(shù)篩選：
此法可用于制備穩(wěn)定混合細(xì)胞株，其優(yōu)點(diǎn)在于能在短時(shí)間內(nèi)得到穩(wěn)定的胞株，且能在任何時(shí)候?qū)⒓?xì)胞稀釋成新的培養(yǎng)皿，傾向于整合靠近轉(zhuǎn)錄始端的位點(diǎn)的基因，容易激活下游基因，但同時(shí)這些整合到轉(zhuǎn)錄活性基因的基因很容易導(dǎo)致整合部位基因的插入失效，影響到克隆的純度。高等株中存在非整合細(xì)胞，這種混合細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞穩(wěn)定結(jié)合，不會(huì)失去生長(zhǎng)的優(yōu)勢(shì)。
細(xì)胞株的凍存步驟：
取培養(yǎng)2～3天生長(zhǎng)旺盛的細(xì)胞，用細(xì)胞培養(yǎng)液將細(xì)胞配成2×106～2×107/ml。在1ml細(xì)胞凍存管中加入0.5ml細(xì)胞懸液，0.4ml小牛血清和0.1ml二甲基亞砜（或甘油），混勻后密封。置4℃ 1小時(shí)，－20℃ 2小時(shí)，然后直接放入液氮中或置液氮蒸汽上過夜后浸入液氮中。
細(xì)胞株的復(fù)蘇流程：
復(fù)蘇時(shí)，從液氮中取出凍存管，立即置37℃水浴中融化細(xì)胞。將細(xì)胞直接加入10ml含15％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中，置37℃ 5％CO2飽和水套式二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。懸浮細(xì)胞待細(xì)胞全部沉降后小心吸去上清液，更換新鮮的上述培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)；帖壁細(xì)胞則培養(yǎng)2～3實(shí)驗(yàn)。
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