——提取效果媲美進口M*品牌

20世紀(jì)80年代中期前，微生物學(xué)家通過人工培養(yǎng)的方法研究土壤微生物生態(tài)系統(tǒng)，而可培養(yǎng)的微生物不到總數(shù)的1%，相當(dāng)多的微生物還未被認知。隨著宏基因組學(xué)的快速發(fā)展，通過提取土壤微生物總DNA來研究生態(tài)系統(tǒng)的方法開始出現(xiàn)。然而，土壤是一個非常復(fù)雜的異質(zhì)體系，其中，含有的腐植酸及腐植酸類似物、酚類化合物、重金屬離子等，在DNA提取過程中如不能有效去除，將直接影響后續(xù)的PCR擴增、核酸雜交、內(nèi)切酶消化等分子操作。

為了解決這一難題，翌圣研發(fā)了一款采用陶瓷珠和二氧化硅顆?；旌隙傻牟Ａе檫M行樣本處理的土壤DNA提取試劑盒—MolPure^® Soil DNA Kit，可有效處理真細菌孢子和內(nèi)生孢子，革蘭氏陽性細菌，酵母，藻類，線蟲和真菌等土壤中的各類微生物。該試劑盒的離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為*新型材料，配合*的裂解液配方可快速回收高純度核酸。提取的DNA純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠，可適用于各種下游應(yīng)用實驗，如酶切、PCR等實驗。

◆  操作便捷：室溫操作，僅需40min即可回收DNA。

◆  產(chǎn)量高：*的玻璃珠能高效裂解土壤微生物，釋放更多DNA，最大限度地提取其產(chǎn)量。

◆  適用范圍廣：適合花壇土、花盆土、農(nóng)田土、山林土、淤泥、黑土等各類型土壤。

◆  純度高：有效去除土壤中腐殖酸、重金屬離子等雜質(zhì)，并與離心柱法純化相結(jié)合，大大地提高了DNA的純度。

圖1. 土壤DNA提取操作流程圖

◆  提取效果媲美進口M*品牌

圖2. 瓊脂糖電泳檢測大腸桿菌16s rDNA的擴增條帶。Y為翌圣品牌，M*為進口品牌，陽性對照為培養(yǎng)的大腸桿菌gDNA，Y1/Y2和M1/M2為1μL洗脫液，M3/M4為M1/M2稀釋3倍后的洗脫液。

◆  比進口O*品牌操作簡單，節(jié)約30min

圖3.  Yeasen土壤DNA提取試劑盒和O*品牌同類型產(chǎn)品操作步驟對比圖。Yeasen土壤DNA提取試劑盒比O*品牌同類型產(chǎn)品步驟省3步，并且提取速度節(jié)約30min。

◆  Q1：試劑盒是如何進行破壁的？

A：MolPure^® Soil DNA Kit采用*的裂解液和珠磨法進行破壁，可有效處理真細菌孢子和內(nèi)生孢子，革蘭氏陽性細菌，酵母，藻類，線蟲和真菌等土壤中的各類微生物。 

◆  Q2：如何解決DNA電泳拖尾嚴(yán)重呢？

A：1、可能原因一：土壤中含有豐富小型生物和易裂解的細菌。這些易裂解的小型生物和細菌在玻璃珠長時間渦旋中會造成DNA降解。

解決方案：可通過減少渦旋時間，或者用高能量的珠磨儀代替手工渦旋。高能量的珠磨儀能提供非常高的能量，在短時間就可以達到破壁效果，能減少DNA的降解。

2、可能原因二：樣品中存在某些化學(xué)物質(zhì)，或者樣品在貯藏過程中發(fā)生降解。

解決方案：針對不同的樣品，采用合適的貯藏條件進行保存，以防止微生物DNA的降解。

◆  Q3：該方法可以獲得所有微生物的DNA嗎？

A：不一定。土壤樣品中含有大量的微生物，有細菌和真菌，以及其他植物根系，小型生物。某些真菌，特別孢子類真菌，因帶有非常厚的細胞壁，無法破壁而導(dǎo)致DNA的丟失。因此，可加強破壁的強度和時間來提取這些難提取的DNA。

◆  Q4：哪些因素會影響DNA的產(chǎn)量呢？

A：土壤樣品中所含的微生物的種類，微生物的數(shù)量，以及土壤樣品中的有機，無機鹽都會直接影響到DNA的產(chǎn)量。

◆  Q5：哪些事項需要注意？

A：注意事項如下：

1） 土壤DNA產(chǎn)量主要來源樣品內(nèi)微生物、植物動物殘渣，冰凍或貯存過程中DNA會發(fā)生不同程度的降解，導(dǎo)致DNA含量降低或條帶成較嚴(yán)重的涂抹狀（即降解）。因此，盡量使用新鮮樣品或貯存時間較短樣品進行DNA提取。

2） 如果土壤樣品中的水分含量比較多，建議先將水分離心去除后再進行提取。

3） 不要省略空柱子離心步驟，該步驟能除去柱子中殘留的乙醇，否則可能會影響下游實驗；如產(chǎn)物點電泳時無法正常沉降，絕大部分情況下由于空甩不*，乙醇殘留所致，可在下次提取中，提高離心機速度或延長空甩時間至5~10min，可解決殘留問題。

HB210817