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孔雀石綠試劑盒樣本前期處理如何處理?

來源:上海研啟生物科技有限公司   2021年09月01日 17:45  

孔雀石綠試劑盒樣本前期處理如何處理?

5 樣本前處理

5.1 樣本處理前須知:

實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實驗結果。

5.2 配液:

配液1:1×樣品復溶液

100 ml為例,取10 ml 10×復溶液加入50ml去離子水和40ml甲醇,充分混勻

配液2:1×工作洗滌液

濃縮洗滌液20倍稀釋(1份洗滌液加19份去離子水)。

5.3 樣本前處理步驟:

5.3.1 魚、蝦

1)取勻質無骨的樣品1 g,加入50 ml離心管中,加入0.3 ml 乙腈、6 ml乙酸乙酯充分震蕩(不少于5分鐘,確保魚肉沒有結塊)

2)室溫下4000r/min 離心10min,取上清液3 ml加入10ml玻璃試管中,再加入氧化劑50 ul,震蕩2分鐘;

3)每管加入助溶劑50 ul(不振蕩)50水浴環(huán)境下氮氣吹干(吹完之后管底部應該有一滴液狀物,當樣本含油脂過高時,此時可見試管底部殘留有黃色粘稠狀液滴);

4)加入1 ml 1×樣品復溶液,溶解混勻,50ul用于分析。

    樣本稀釋倍數(shù):2     檢測下限:0.1ppb

6 注意事項

6.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫(25℃)會導致所有標準的OD值偏低。

6.2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會出現(xiàn)標準曲線不成線性,重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。

6.3 混合要均勻,洗板要*,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性。

6.4 在所有孵育過程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射。

6.5 不要使用過了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。

6.6 顯色液若有任何顏色表明變質,應當棄之。0標準的吸光度值小于0.5個單位(A450nm< 0.5 )時,表示試劑可能變質。

6.7 反應終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。

 


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