孔雀石綠試劑盒樣本前期處理如何處理？

5 樣本前處理

5.1 樣本處理前須知：

實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實驗結果。

5.2 配液：

配液1：1×樣品復溶液

以100 ml為例，取10 ml 10×復溶液加入50ml去離子水和40ml甲醇，充分混勻。

配液2：1×工作洗滌液

將濃縮洗滌液20倍稀釋(1份洗滌液加19份去離子水)。

5.3 樣本前處理步驟：

5.3.1 魚、蝦

1）取勻質無骨的樣品1 g，加入50 ml離心管中，加入0.3 ml 乙腈、6 ml乙酸乙酯，充分震蕩（不少于5分鐘，確保魚肉沒有結塊）；

2）室溫下4000r/min 離心10min，取上清液3 ml加入10ml玻璃試管中，再加入氧化劑50 ul，震蕩2分鐘；

3）每管加入助溶劑50 ul(不振蕩)，50℃水浴環(huán)境下氮氣吹干（吹完之后管底部應該有一滴液狀物，當樣本含油脂過高時，此時可見試管底部殘留有黃色粘稠狀液滴）；

4）加入1 ml 1×樣品復溶液，溶解混勻，取50ul用于分析。

    樣本稀釋倍數(shù)：2     檢測下限：0.1ppb

6 注意事項

6.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫（25℃）會導致所有標準的OD值偏低。

6.2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會出現(xiàn)標準曲線不成線性，重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。

6.3 混合要均勻，洗板要*，在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性。

6.4 在所有孵育過程中，用蓋板膜封住微孔板，避免光線照射。

6.5 不要使用過了有效期的試劑盒，不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。

6.6 顯色液若有任何顏色表明變質，應當棄之。0標準的吸光度值小于0.5個單位（A450nm< 0.5 ）時，表示試劑可能變質。

6.7 反應終止液有腐蝕性，避免接觸皮膚。