細(xì)胞，生物學(xué)名詞。構(gòu)成生物體的基本單位。體形極微，在顯微鏡下始能窺見。形狀多種多樣。主要由細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)構(gòu)成，表面有薄膜。動(dòng)植物細(xì)胞結(jié)構(gòu)大致相同。植物細(xì)胞質(zhì)膜外有細(xì)胞壁，細(xì)胞壁中常有質(zhì)體，動(dòng)物細(xì)胞質(zhì)中常有中心體，而高等植物細(xì)胞中則無(wú)。細(xì)胞有運(yùn)動(dòng)、營(yíng)養(yǎng)和繁殖等機(jī)能。

貼壁細(xì)胞：

1.  取普通潔凈蓋玻片于70%乙醇中浸泡5分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間，無(wú)菌超凈臺(tái)內(nèi)吹干或用細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)PBS或0.9%NaCl等溶液洗滌三遍，再用細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌一遍。將蓋玻片置于六孔板內(nèi)，種入細(xì)胞培養(yǎng)過夜，使約為50%-80%滿。

2.  按照特定的實(shí)驗(yàn)?zāi)康奶幚砑?xì)胞后，吸盡培養(yǎng)液，加入1 ml固定液，固定10分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間(可4°C固定過夜)。

3.  去固定液，用TBST工作液洗3次，每次3~5分鐘，吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床，或手動(dòng)晃動(dòng)數(shù)次。

4.  用試劑盒中的正常山羊血清封閉液(E-IR-R110)封閉30分鐘，可以在搖床上輕輕搖動(dòng)。

5.  去除封閉液，用稀釋的特定一抗?jié)窈袃?nèi)37°C避光孵育60分鐘，可以在搖床上輕輕搖動(dòng)。為增強(qiáng)與一抗的結(jié)合，可以4°C孵育過夜。

6.  去除一抗，用TBST工作液洗滌3~5次，每次3~5分鐘。每次洗滌時(shí)都可以在搖床上輕輕搖動(dòng)。

7.  去除TBST工作液，加入100 μL稀釋好的熒光標(biāo)記的二抗?jié)窈袃?nèi)37°C避光孵育60分鐘。

8.  TBST工作液洗滌3~5次，每次3~5分鐘，期間適當(dāng)注意避光操作。

9.   復(fù)染核：滴加試劑盒中的DAPI染色液(E-IR-R103)避光孵育5 min，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行染核，TBST工作液洗滌玻片5分鐘，洗滌4次去除多余的DAPI染色液。

10.   滴一滴試劑盒提供的抗熒光淬滅封片液(E-IR-R119)于載玻片上，蓋上貼有細(xì)胞的蓋玻片，盡量避免氣泡。使細(xì)胞接觸封片液，切勿弄反。

11.   如果一抗選用適當(dāng)，在熒光顯微鏡下可以觀察到熒光。

懸浮細(xì)胞：

A.   離心收集細(xì)胞樣品于1.5 ml離心管內(nèi)，吸除上清后輕輕彈散細(xì)胞。

B.   加入0.5 ml固定液，緩緩懸起細(xì)胞，固定10分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間(可4°C過夜)。

C.   離心去固定液，用TBST工作液洗3次，每次3~5分鐘。洗滌期間可以用手或搖床輕輕晃動(dòng)。

D.   最后一次離心后吸去大部分液體保留約50 μL液體，再緩緩懸起細(xì)胞，滴加至載玻片上，盡量使細(xì)胞分布均勻。

E.   稍晾干，使細(xì)胞貼在載玻片上不易隨液體流動(dòng)。如果條件許可，可以使用適當(dāng)?shù)碾x心機(jī)，通過離心把細(xì)胞貼緊在載玻片上。

F.   用試劑盒中的正常山羊血清封閉液(E-IR-R110)封閉30分鐘。

G.   去封閉液，用稀釋的特定一抗?jié)窈袃?nèi)37°C避光孵育60分鐘。為增強(qiáng)與一抗的結(jié)合，可以4°C孵育過夜。

H.   去除一抗，用TBST工作液洗滌3~5次，每次3~5分鐘。

I.    去除TBST工作液，加入100 μL稀釋好的熒光標(biāo)記的二抗?jié)窈袃?nèi)37°C避光孵育60分鐘。

J.    TBST工作液洗滌3~5次，每次3~5分鐘，期間適當(dāng)注意避光操作。

K.   復(fù)染核：滴加試劑盒中的DAPI染色液(E-IR-R103)避光孵育5 min，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行染核，TBST工作液洗滌玻片5分鐘，洗滌4次去除多余的DAPI染色液。

L.    滴一滴試劑盒提供的抗熒光淬滅封片液(E-IR-R119)于載玻片上，蓋上蓋玻片，盡量避免氣泡。

M.   如果一抗選用適當(dāng)，在熒光顯微鏡下可以觀察到熒光。