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來源：翌圣生物科技（上海）股份有限公司 2021年09月03日 15:10

分子克隆技術(shù)發(fā)展至今，從經(jīng)典的酶切酶連法到簡便、快速的同源重組法，同源重組技術(shù)廣受科研小伙伴的青睞！翌圣一步法快速克隆試劑盒（Cat#10911、10912）自上市以來，受到了眾多小伙伴的支持！好評如潮！看到各位小伙伴的反饋結(jié)果，小翌按捺不住內(nèi)心的喜悅，要與大家一同分享~

一步法快速克隆試劑盒

翌圣一步法快速克隆試劑盒是一種利用同源重組的原理，進(jìn)行無縫克隆的技術(shù)。該技術(shù)無需考慮酶切位點(diǎn)，將PCR產(chǎn)物定向克隆至任何載體的任何位點(diǎn)，可高效克隆50 bp-10 kb片段。操作過程簡單快速，只需50°C，20 min即可完成反應(yīng)。勁爆的是，多個(gè)片段也可以同時(shí)克隆哦！

數(shù)據(jù)展示

北京大學(xué)

再也不用擔(dān)心片段太小，載體過大連不上的問題了

克隆方案：克隆SfGFP1-9基因(588 bp)到載體pBOBI-N-flag(9000 bp)上，檢測其表達(dá)。

使用Hieff Clone® Plus One Step Cloning Kit(Cat#10911)進(jìn)行克隆，陽性率100%。.jpg

圖1. 使用Hieff Clone^® Plus One Step Cloning Kit(Cat#10911)進(jìn)行克隆，陽性率100%。

A：陰性對照轉(zhuǎn)化平板。B：重組轉(zhuǎn)化平板。C：線性化載體檢測電泳圖。D：目的片段檢測電泳圖。E：克隆測序?qū)Ρ葓D。

南京農(nóng)業(yè)大學(xué)

10 kb載體連接，克隆數(shù)與陽性率都很高

克隆方案：將目的片段Gmclc1(2352 bp)與表達(dá)載體pCAMBIA1300(10217 bp)連接，構(gòu)建重組載體。

圖2. 使用Hieff Clone^® Plus One Step Cloning Kit(Cat#10911)進(jìn)行克隆，克隆成功，克隆陽性率為100%。

A：陰性對照轉(zhuǎn)化平板。B：重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化平板。C：1和2分別為原始載體和線性化載體檢測電泳圖。D：目的片段檢測電泳圖。E：菌落PCR鑒定電泳圖。F：重組質(zhì)粒的酶切鑒定電泳圖。

微生物所

輕輕松松5片段連接

克隆方案：克隆外源基因Pcch(576+867+915+647 bp)到pBR322質(zhì)粒(3996 bp)上，用以表達(dá)Pcch蛋白。

圖3. 使用Hieff Clone^® Multi One Step Cloning Kit(Cat#10912)進(jìn)行克隆，5個(gè)片段（總長度7007 bp）一次連接成功。

A：重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化平板。B：載體酶切后電泳圖。C：菌落PCR驗(yàn)證結(jié)果；1為原始質(zhì)粒，2-5為重組質(zhì)粒，僅檢測863 bp的一個(gè)目的片段，6為假陽性。D：陽性克隆測序結(jié)果。

仁濟(jì)醫(yī)院

總長度16 kb以上，一次成功

克隆方案：克隆Setd2基因（7500 bp）到pCDH載體（8000 bp）。

圖4. 使用Hieff Clone^® Plus One Step Cloning Kit(Cat#10911)進(jìn)行克隆，克隆成功。

A：陰性對照轉(zhuǎn)化平板。B：重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化平板。C：載體和目的片段檢測電泳圖。D：菌落PCR鑒定電泳圖。

部分發(fā)表文獻(xiàn)

1. Jiang, Y., et al., Plants transfer lipids to sustain colonization by mutualistic mycorrhizal and parasitic fungi[J]. Science, 2017. (IF37.205)

2. Liu C X, Li X, Nan F, et al. Structure and degradation of circular RNAs regulate PKR activation in innate immunity[J]. Cell, 2019. (IF31.398)

3. Xing, Y.H., et al., SLERT Regulates DDX21 Rings Associated with Pol I Transcription[J]. Cell, 2017. 169(4): p. 664-678.e16. (IF31.398)

4. Wang Y, Hu SB, et al. Genome-wide screening of NEAT1 regulators reveals cross-regulation between paraspeckles and mitochondria[J]. Nat Cell Biol. 2018 Oct;20(10):1145-1158. (IF 20.46)

5. Li X., et al., Coordinated circRNA Biogenesis and Function with NF90/NF110 in Viral Infection[J]. Mol Cell. 2017 Jul 20;67(2):214-227.e7. (IF14.548)

6. Yao R W, Xu G, Wang Y, et al. Nascent Pre-rRNA Sorting via Phase Separation Drives the Assembly of Dense Fibrillar Components in the Human Nucleolus[J]. Molecular cell, 2019. (IF14.548)

7. Wu P, Zhang T, Liu B, et al. Mechano-regulation of peptide-MHC class I conformations determines TCR antigen recognition[J]. Molecular cell, 2019, 73(5): 1015-1027. e7. (IF14.548)

8. Qiao HH, Wang F, et al. An ef?cient and multiple target transgenic RNAi technique with low toxicity in Drosophila[J]. Nat Commun. 2018 Oct 8;9(1):4160. (IF 12.353)

效果大家都看到了，那么我們再來看下為什么同源重組法廣受大家歡迎呢？

與傳統(tǒng)的酶切酶連法相比（圖4），一步法克隆技術(shù)足足少了2個(gè)步驟（片段酶切+產(chǎn)物純化），這2步最少也要30分鐘，省下的時(shí)間去運(yùn)動一下，比如打個(gè)羽毛球~跑個(gè)步~科研之余，強(qiáng)身健體，擁有一個(gè)更健康的體魄、一張更陽光的臉龐~還有一段開掛的人生~

圖5. 分子克?。ㄝd體構(gòu)建）流程對比圖

產(chǎn) 品推薦

名稱	貨號	規(guī)格
Hieff Clone® Plus One Step Cloning Kit 一步法快速克隆試劑盒	10911ES20	20 T
Hieff Clone® Plus Multi One Step Cloning Kit 多片段一步法快速克隆試劑盒	10912ES10	10 T

好啦！看完本期分享的內(nèi)容，你是不是也心動啦~心動就行動起來吧！小翌帶你邊做實(shí)驗(yàn)邊擼福利~

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小翌給沒有用過的小伙伴申請了試用福利喲！關(guān)注翌圣公眾號，回復(fù)消息“克隆”，即可領(lǐng)取克隆試劑盒試用裝。

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