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重組人BMP4的分泌表達(dá)優(yōu)點(diǎn)
重組人BMP4蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式，原核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為凍干粉狀態(tài)，真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為溶液態(tài)保存，這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定，在零下八十℃條件下可保存數(shù)年。凍干粉在使用前需進(jìn)行溶解，其中溶解的方法非常關(guān)鍵，因?yàn)槿芙獠缓脮?huì)降低蛋白的效用。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細(xì)注意。
重組人BMP4蛋白真核表達(dá)與原核表達(dá)如何選擇：
真核表達(dá)：常用酵母、昆蟲、動(dòng)物和哺乳動(dòng)物細(xì)胞。其優(yōu)點(diǎn)是根據(jù)原核生物蛋白與靶DNA的高度特異性相互作用而設(shè)計(jì)，不存在基因的非特異性激活或抑制。它可以誘導(dǎo)高達(dá)105倍的高效基因表達(dá)?？梢試?yán)格控制基因表達(dá)。
原核表達(dá)：它的優(yōu)點(diǎn)是可以在短時(shí)間內(nèi)獲得基因表達(dá)產(chǎn)物，而且成本相對(duì)較低。方法也簡單，可以表達(dá)的蛋白質(zhì)也很多。但缺點(diǎn)是表達(dá)的蛋白質(zhì)沒有經(jīng)過修飾，不一定具有天然活性，表達(dá)系統(tǒng)不能調(diào)節(jié)表達(dá)時(shí)間和表達(dá)水平。一些基因的持續(xù)表達(dá)會(huì)對(duì)宿主細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用，過度表達(dá)可能導(dǎo)致非生理反應(yīng)。目前，蛋白質(zhì)往往以包涵體的形式表達(dá)，這也導(dǎo)致了產(chǎn)品純化的困難。可用于抗體制備或檢測(cè)，但應(yīng)避免功能試驗(yàn)。
重組人BMP4的分泌表達(dá)優(yōu)點(diǎn)：
1、一些可被細(xì)胞內(nèi)蛋白酶所降解的蛋白質(zhì)分泌到周質(zhì)或培養(yǎng)基中可增加其穩(wěn)定性；
2、有些在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)時(shí)無活性的蛋白分泌表達(dá)時(shí)能夠按適當(dāng)?shù)姆绞竭M(jìn)行準(zhǔn)確折疊，增加到蛋白的活性；
3、由于蛋白質(zhì)信號(hào)肽和編碼序列間被切割，所以分泌蛋白產(chǎn)物不含氨基酸起始密碼子 ATG 所編碼的甲硫氨酸，而甲硫氨酸會(huì)影響許多蛋白的活性。
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