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raw264.7細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)分享

來(lái)源:武漢尚恩生物技術(shù)有限公司   2021年09月09日 15:13  
  raw264.7細(xì)胞源自Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤。sIg-,Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細(xì)胞株不分泌可檢測(cè)到的病毒顆粒,XC斑點(diǎn)形成試驗(yàn)陰性。可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖??梢钥贵w依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞。LPS或PPD處理2天可誘導(dǎo)分解紅血球但對(duì)腫瘤靶細(xì)胞無(wú)作用。
  raw264.7細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn):
  1.基本情況:小鼠來(lái)源白血病毒誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞,屬于巨噬細(xì)胞,貼壁生長(zhǎng)。下圖是ATCC來(lái)源。主流觀點(diǎn)是以橢圓圓形細(xì)胞為主,激活分化后才有觸角。
  形態(tài)以類圓形和不規(guī)則為主,一般1--2個(gè)核,極少數(shù)有3個(gè)核,胞漿伸展時(shí)胞體較大。鏡下細(xì)胞為小珍珠似的圓形橢圓形。
  2.培養(yǎng)情況
  培養(yǎng)條件:10%FBS+高糖DMEN,進(jìn)口gibco血清更好
  傳代:細(xì)胞增殖較快,70%即可傳代,細(xì)胞有觸角也提示需要傳代,1:3----1:6傳代,推薦使用皿。傳代時(shí)切記不要使用胰酶,正常情況下此細(xì)胞貼壁不牢,直接吹打即可,胰酶消化會(huì)使細(xì)胞伸出觸角改變形態(tài)。我是直接用培養(yǎng)基吹打,也可以用PBS,感覺(jué)無(wú)差異。這個(gè)細(xì)胞增殖較快,培養(yǎng)基消耗快容易變黃,要勤換液。
  凍存和復(fù)蘇:和普通細(xì)胞無(wú)異。
  raw264.7細(xì)胞作為巨噬細(xì)胞有很強(qiáng)的吞噬能力,吞噬抗原后伸出長(zhǎng)角,就是大家常見(jiàn)的偽足。同時(shí)貼壁黏附能力增強(qiáng),傳代時(shí)難以消化下來(lái)。該細(xì)胞貼壁時(shí)間短,成片生長(zhǎng),似小菌落般小片生長(zhǎng),連成一片并會(huì)疊層。傳代密度不易過(guò)高或者過(guò)低,過(guò)低會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢甚至不生長(zhǎng),過(guò)高,細(xì)胞會(huì)長(zhǎng)出偽足。
  3.關(guān)于RAW264.7分化,正常細(xì)胞為貼壁不牢的圓形橢圓形細(xì)胞,分化后伸出偽足,貼壁能力增強(qiáng)。
  避免方法:
  1,血清建議采用進(jìn)口的真血清,
  2,密度不要太高或者太低,傳代時(shí)切不可拖延時(shí)間,
  3,傳代時(shí)切不可胰酶消化,直接吹打就能下來(lái),
  4,不要污染,包括其他細(xì)胞株的污染。

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