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技術(shù)服務(wù)|納米抗體親和力成熟服務(wù)

來(lái)源:安諾倫(北京)生物科技有限公司   2021年09月13日 10:45  
1993年,比利時(shí)布魯塞爾自由大學(xué)免疫學(xué)家Hamers-Casterman教授以及他的同事們?cè)隈橊劊橊効?,后?lái)研究證實(shí)也包括單峰駱駝和羊駝)的血清中發(fā)現(xiàn)了一種與傳統(tǒng)抗體結(jié)構(gòu)不同的新型抗體,這種抗體僅僅由兩條重鏈構(gòu)成,被稱(chēng)為重鏈抗體(heavy-chain antibody, HCAb)。重鏈抗體的重鏈的可變區(qū)稱(chēng)為VHH(variable domain of heavy chain of heavy-chain antibody),通過(guò)體外重組表達(dá)制備的VHH分子質(zhì)量?jī)H僅為15kDa,是傳統(tǒng)抗體的十分之一左右,是抗原結(jié)合片段(scFV,VH-VL)的二分之一左右,因此被稱(chēng)為納米抗體(nanobody, Nb)。

納米抗體優(yōu)勢(shì)

納米抗體諸多方面均優(yōu)于傳統(tǒng)抗體  ?;谘蝰勚劓溈贵w的VHH單域抗體的特殊結(jié)構(gòu),兼具了傳統(tǒng)抗體與小分子藥物的優(yōu)勢(shì),幾乎wangmei克服了傳統(tǒng)抗體的開(kāi)發(fā)周期長(zhǎng),穩(wěn)定性較低,保存條件苛刻等缺陷,逐漸成為新一代治療性生物醫(yī)藥與臨床診斷試劑中的新興力量。相比于常規(guī)抗體,納米抗體的優(yōu)勢(shì)有:
1.分子量小,可穿透血腦屏障;
2.原核或真核系統(tǒng)中高表達(dá);
3.特異性強(qiáng),親和力高;

4.對(duì)人的免疫原性弱。

納米抗體的篩選和制備

1、納米抗體基因文庫(kù)的構(gòu)建

抗原特異的納米抗體可以通過(guò)免疫庫(kù)、天然庫(kù)或合成庫(kù)產(chǎn)生,其中免疫庫(kù)的構(gòu)建常用的納米抗體開(kāi)發(fā)技術(shù)。

用純化的靶抗原對(duì)羊駝進(jìn)行免疫,免疫成功后在羊駝血液中提取包含成熟B細(xì)胞的淋巴細(xì)胞。抽提淋巴細(xì)胞的RNA并反轉(zhuǎn)成cDNA文庫(kù),利用特殊設(shè)計(jì)的引物在cDNA文庫(kù)中再次進(jìn)行PCR擴(kuò)增,得到特異的基因片段;隨后將特異的基因片段拼接重組在噬菌體載體上,并轉(zhuǎn)染大腸桿菌,最終完成納米抗體基因文庫(kù)的構(gòu)建。

2、特異性抗體的篩選將靶點(diǎn)抗原或者帶有抗原的物質(zhì)直接/間接的固定在固體載體上,隨后加入噬菌體文庫(kù)和抗原相互作用。作用一段時(shí)間后陽(yáng)性噬菌體會(huì)和抗原結(jié)合,用洗滌液洗滌固體載體表面,可以將未結(jié)合或非特異結(jié)合的噬菌體洗去。隨后用強(qiáng)酸或者強(qiáng)堿破壞固體載體上抗原和陽(yáng)性噬菌體的結(jié)合,從而得到陽(yáng)性噬菌體溶液。一般重復(fù)進(jìn)行2-3輪的篩選即可獲得符合開(kāi)發(fā)要求的納米抗體克隆。

3、納米抗體的生產(chǎn)制備

獲得符合要求的抗體克隆后需要進(jìn)行抗體的大規(guī)模生產(chǎn)制備。納米抗體的生產(chǎn)制備是DNA轉(zhuǎn)錄到mRNA然后翻譯成蛋白的過(guò)程。由于抗體具有復(fù)雜的結(jié)構(gòu),因此在表達(dá)體系中需要復(fù)雜的細(xì)胞器來(lái)完成正確的表達(dá)、折疊和加工。目前,在工業(yè)界有一系列成熟的表達(dá)體系可用于抗體表達(dá),不同的表達(dá)體系之間各有優(yōu)劣勢(shì)差異。抗體設(shè)計(jì)的*功能表達(dá)和純化是決定它們實(shí)現(xiàn)應(yīng)用命運(yùn)的關(guān)鍵因素,因此選擇合適的表達(dá)體系是獲得最大收益的重要環(huán)節(jié)。

哺乳動(dòng)物細(xì)胞系由于免疫原性低,且其細(xì)胞器可提供*的折疊、分泌和翻譯后修飾,是治療性抗體的shou選表達(dá)系統(tǒng),但同時(shí)存在生產(chǎn)成本高、技術(shù)難度大等缺陷;大腸桿菌表達(dá)體系由于其便利的生產(chǎn)和操作、快速的生產(chǎn)周期以及成熟的平臺(tái)體系z(mì)ui歡迎,然而,由于氧化氛圍和折疊能力的限制,大腸桿菌不能表達(dá)具有復(fù)雜結(jié)構(gòu)和富含二硫鍵的重組抗體;酵母是另一個(gè)普遍使用的微生物表達(dá)宿主,其結(jié)合了原核表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)(周期短、成本低、操作簡(jiǎn)單)和真核表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)(正確的折疊、修飾和分泌),使得它成為zui歡迎的可表達(dá)全長(zhǎng)IgG或者其他抗體形式的宿主。還有其他一些系統(tǒng)可用于表達(dá)重組抗體,比如絲狀真菌、藻類(lèi)、原蟲(chóng)、昆蟲(chóng)細(xì)胞、轉(zhuǎn)基因植物和動(dòng)物,其中對(duì)轉(zhuǎn)基因植物和動(dòng)物的研究處于相對(duì)初始的階段,需要進(jìn)一步的深入研究。對(duì)于納米抗體,由于其結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,水溶性較好,因此可以利用成本比較低的細(xì)菌表達(dá)系統(tǒng)和酵母表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行大量生產(chǎn)。例如,比利時(shí)Ablynx公司建立了成熟的畢赤酵母表達(dá)和純化工藝。納米抗體在哺乳動(dòng)物細(xì)胞系中生產(chǎn)鮮有報(bào)道,因?yàn)樯a(chǎn)成本的昂貴會(huì)限制該體系的發(fā)展。在植物和動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行納米抗體生產(chǎn)也有大量的研究報(bào)道,跟傳統(tǒng)抗體生產(chǎn)體系相似,這兩種體系生產(chǎn)的納米抗體具有成本低、污染少安全性高的特點(diǎn),具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。

艾柏森納米抗體親和力成熟服務(wù)

納米抗體可以通過(guò)天然抗體庫(kù)、免疫抗體庫(kù)或者合成抗體庫(kù)篩選獲得。通過(guò)不同方法制備的納米抗體親和力差異較大,在醫(yī)療診斷應(yīng)用時(shí)常常要提高抗體的親和力。艾柏森生物基于專(zhuān)業(yè)的噬菌體展示系統(tǒng)和酵母展示系統(tǒng),應(yīng)用*的定點(diǎn)突變技術(shù),構(gòu)建大容量突變體文庫(kù),篩選出高親和力的抗體,可提高親本抗體10-100倍以上,達(dá)到nM級(jí)別。


納米抗體親和力成熟服務(wù);Nanobody Affinity Matration Services


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