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BRL 3A細胞BRL 3A大鼠肝細胞簡介

來源:上海琛藝實業(yè)有限公司   2021年09月15日 09:24  

上海琛藝實業(yè)有限公司經過數年的努力發(fā)展已迅速成為集產品研發(fā)、生產、經營為一體的專業(yè)化生物工程公司。公司新引進細胞上千株,其中人的已通過STR鑒定的有幾百株,歡迎各位選購。。。。。。

產品名稱:BRL 3A細胞|BRL 3A大鼠肝細胞

特點:細胞代數為4代以內,細胞耐藥倍數8倍以上;
包裝:內層無菌自封袋;專用防壓泡沫盒;外層防壓保溫氣泡袋;說明書
細胞來源:ATCC、sciencell、ICLC
貨期:1-2周
運輸方式:快遞運輸
售后:收到細胞后12天,如發(fā)現細胞有質量問題(如污染,死亡,快遞運輸等原因)時,應出具書面質量問題報告并及時通知銷售人員,我們將盡快為您解決!

注:耐藥細胞培養(yǎng)操作流程和普通細胞培養(yǎng)方法基本一致,只是在培養(yǎng)中會加藥維持篩選壓力

· BRL 3A細胞|BRL 3A大鼠肝細胞

· 三、細胞生長條件:

 

一、組成:

組份

數目

細胞

 1 T-25

細胞說明書

一份

二、細胞簡介:

生長特性:

貼壁生長

 

細胞來源:

ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進

培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基:90%1640培養(yǎng)基 +10%FBS(推薦BI  -04-001-1ACS胎牛血清)

氣相:空氣95%,二氧化碳5%

溫度:37

培養(yǎng):

一、貼壁細胞

1.75%酒精噴灑整個瓶消毒,將其平躺置于培養(yǎng)箱中進行2-3小時的緩沖,.然后置于無菌操作臺,打開瓶口,將其中的培養(yǎng)液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基并置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據細胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液以及傳代;

2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%,需要對其進行傳代,第yi次傳代比例為1:2。

3傳代步驟:將0.25%EDTA胰酶置于37°預熱,倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,往培養(yǎng)瓶中加入1mlPBS,輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1ml預熱好的胰酶,置于37°孵育消化(第yi次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察,以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為zui佳消化時間,記錄消化時間,以便于下次消化),消化好后加入1ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞,使之*脫落,然后收集細胞懸液,1200rpm離心3min,棄上清,加入*培養(yǎng)基重懸細胞,進行傳代。

 

二、懸浮細胞

1.75%酒精噴灑整個瓶消毒,然后置于無菌操作臺,打開瓶口,輕輕吹打后,將其中的細胞懸液轉移到離心管中,然后1200rpm離心3min,去上清;

2.將離心好的細胞轉移至T-25瓶中,并加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基,然后將其置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據細胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液(離心后去舊液,加入新鮮培養(yǎng)基);

3.顯微鏡觀察細胞數目比較多時,對其進行傳代,第yi次傳代比例為1:2(離心后平均分成兩瓶培養(yǎng))。

 

細胞總數:

1~3*106

傳代周期:

2-3

傳代比例:

1:2~1:4

換液頻率:

2-3

凍存液:

90%FBS+10%DMSO

 

四、注意事項:

1 收到細胞后首先觀察T-25是否有損壞漏液、渾濁等現象,若有上述現象發(fā)生請及時和我們聯系。

2 瓶中運輸的培養(yǎng)液不能重復使用,請換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)

3 對于貼壁細胞,若大部分細胞漂浮,置于培養(yǎng)箱隔夜觀察,大部分漂浮細胞重新貼壁,表明細胞活力正常,繼續(xù)培養(yǎng),剩余漂浮的細胞可以去掉;若大部分細胞仍然不貼壁,將漂浮的細胞離心收集,用臺盼藍染色鑒定細胞活力,并與本公司銷售人員及時聯系。

4 建議客戶收到細胞后不同倍鏡各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),如細胞狀態(tài)出現問題請于72h與本公司銷售聯系,以便于更好的幫您解決問題,超過時間我段,本公司則默認細胞狀態(tài)良好,不免費對后續(xù)細胞狀態(tài)問題進行售后

 

做細胞實驗的同學看過來。

選擇上海琛藝生物細胞3個理由:

1、細胞狀態(tài)好,形態(tài)佳,易成活,是市面上比較好養(yǎng)的細胞之一;

2、物流迅速,復蘇好后發(fā)貨,次日就能到;

3、使用我司推薦的進口品牌血清進行培養(yǎng)實驗,效果更佳。

 

 

專業(yè)技術人員萬工收藏的細胞培養(yǎng)小技巧:

1. 買細胞要去靠譜的地方買,比如 ATCC 或者上海琛藝。一般上面會有針對細胞的介紹,這樣培養(yǎng)之前可以了解細胞正常生長的狀態(tài)圖、傳代、培養(yǎng)基的類型等。

2. 不管是買的細胞,還是別人惠贈的細胞,剛拿到手趕緊的做兩件事:檢測是否有支原體污染;迅速擴增凍存,凍存細胞復蘇后第二天更換一次培養(yǎng)基。

3. 發(fā)現細胞有污染迅速處理掉,特別是當你養(yǎng)了很多種細胞時。細菌污染、真菌污染很容易發(fā)現,支原體污染的話,細胞會長的慢,可以買個支原體檢測的試劑盒定期檢測一下。

4. 不同細胞生長周期不同。有的生長很快,比如說 MDA-MB-231,傳代的時候取離心懸液的十分之一就已經足夠了。有的又是特別慢,比如 BT474,傳代是一分二,復蘇起始的時候兩周多才能長滿。這就需要要在培養(yǎng)細胞的過程中多多摸索。

5. 對于嬌弱的細胞,就得細心呵護。胰酶消化不能過久,吹得時候要輕柔,離心時候也要注意轉速和時間。每天都要去看一下細胞,肉眼觀察培養(yǎng)基狀況、顯微鏡下觀察細胞生長狀況。記住,是每天。

 

 

細胞培養(yǎng)常見問題及解決方法

問題

原因

解決方案

細胞生長緩慢

生長培養(yǎng)基使用不當

按照生產商的建議,使用相應的預熱生長培養(yǎng)基。

生長培養(yǎng)基中血清質量差

使用其他批次血清。

傳代操作不當

按照生產商的建議消化時間及傳代比例進行操作。

換液過于頻繁

降低換液頻率,參考生產商推薦的換液頻率。

細胞傳代次數過多

使用傳代次數較少的健康細胞。

細胞生長超過匯合狀態(tài)

哺乳動物細胞傳代應在細胞處于對數期、未達到匯合狀態(tài)時進行,建議細胞密度達 80-90%傳代。

細胞被支原體污染

將細胞、培養(yǎng)基和試劑丟棄;新取一只凍存細胞,并且使用新的培養(yǎng)基和試劑。

細胞復蘇存活率低

細胞凍存不當

新取一只凍存細胞,并儲存在液氮中。將細胞儲存在液氮中,直至復蘇。

自行制備的凍存細胞無活性

將細胞按照生產商推薦的密度凍存。

制備凍存細胞時使用傳代次數少的細胞。

嚴格按照生產商推薦的操作程序凍存細胞。請注意本手冊推薦的冷凍程序是凍存細胞的一般流程,只能作為指導原則使用。

新取一只凍存細胞。

細胞復蘇方法不當

嚴格按照生產商推薦的操作程序復蘇細胞。請注意本手冊推薦的解凍程序是復蘇細胞的一般流程,只能作為指導原則使用。

確保冷凍細胞解凍迅速,接種前用預熱的生長培養(yǎng)基緩慢稀釋細胞。

復蘇培養(yǎng)基使用不當

使用生產商推薦的培養(yǎng)基。確保培養(yǎng)基使用前已經預熱。

細胞稀釋過度

按照生產商的建議,將解凍后的細胞高密度接種,以改善復蘇效果。

處理細胞時動作不夠輕柔

凍存和復蘇過程對大多數細胞都會造成不利影 響。不要通過渦旋振蕩或者用力敲打培養(yǎng)瓶的方法使細胞脫落(培養(yǎng)昆蟲細胞時除外),也不要高速離心細胞。

凍存液中所用保護劑在儲存過程中未避光

如果未避光儲存,凍存保護劑會轉變?yōu)閷毎卸拘缘奈镔|;新取一只凍存保護劑,重新凍存細胞。

 

 ★由于細胞庫現有細胞類目多,為了不出現混亂錯誤,需要了解相關細胞價格及詳細資料直接call,對您造成的不便還請見諒!
 ★注:如運輸過程中導致細胞污染或者死亡,我們將無條件補發(fā)
       收貨后十個工作日內有其他問題提供照片可半價重發(fā)
最后,通過低溫保藏儲備一些細胞,以防支原體大面積來襲。如果支原體有抬頭的跡象,或常規(guī)檢測呈陽性結果,那么的補救措施是扔掉所有培養(yǎng)物,清潔培養(yǎng)箱和超凈臺,一切從頭開始。當然,你得確保儲備的細胞是不含支原體的。

上海琛藝實業(yè)耐藥細胞株提供STR鑒定,上百株細胞等待您的選購,可以聯系銷售陳靜。

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