上海琛藝實(shí)業(yè)有限公司新增細(xì)胞庫，具有自己的研發(fā)細(xì)胞培養(yǎng)庫，上千株細(xì)胞具有STR鑒定，開學(xué)大放送，*，同時(shí)還有好禮相送，具體聯(lián)系我們銷售人員。。。。

產(chǎn)品名稱：NCI-H1299-LUC人肺腺癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記 細(xì)胞培養(yǎng)步驟

?細(xì)胞數(shù)量： 1*10^6

?細(xì)胞種屬： 人源

?生長特性： 貼壁

?培養(yǎng)基： DMEM-H

?形態(tài)特征： 成纖維細(xì)胞樣

?傳代方法： 1:3傳代,2-3天傳一代

?培養(yǎng)條件： 胎牛血清至最終濃度為10％。環(huán)境：空氣，95％;二氧化碳（CO2），5％；溫度，37℃

?細(xì)胞描述： 親本L的亞克隆，是最早建立的連續(xù)傳代細(xì)胞之一，L細(xì)胞源自100天的雄性C3H/An小鼠的皮下網(wǎng)眼狀空隙和脂肪組織。APRT+，HPRT+。

?細(xì)胞凍存： 液氮凍存（凍存液基礎(chǔ)培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO）

?細(xì)胞運(yùn)輸： 干冰運(yùn)輸（2ml凍存管）或活細(xì)胞運(yùn)輸（T25瓶）

NCI-H1299-LUC人肺腺癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記 細(xì)胞培養(yǎng)步驟

形態(tài)特性 上皮細(xì)胞樣　 

生長特性 貼壁生長 

凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS　 

細(xì)胞周期分為細(xì)胞間期和細(xì)胞分裂期，細(xì)胞間期較長，而細(xì)胞分裂期較短。

細(xì)胞間期是為細(xì)胞分裂的準(zhǔn)備時(shí)期，表現(xiàn)為細(xì)胞增大，營養(yǎng)物質(zhì)增多。細(xì)胞分裂期則是一個(gè)細(xì)胞由兩個(gè)細(xì)胞分解為一個(gè)細(xì)胞的過程。

細(xì)胞是生命的基本單位，細(xì)胞的特殊性決定了個(gè)體的特殊性，因此，對細(xì)胞的深入研究是揭開生命奧秘、改造生命和征服疾病的關(guān)鍵。細(xì)胞生物學(xué)已經(jīng)成為當(dāng)代生物科學(xué)中發(fā)展的一門學(xué)科，是生物、農(nóng)學(xué)、醫(yī)學(xué)、畜牧、水產(chǎn)和許多生物相關(guān)專業(yè)的一門必修課程。

依據(jù)細(xì)胞種類和濃度，于無菌操作臺內(nèi)取 10 ml培養(yǎng)基加至 T25或 T75 flask中。取出已解凍之細(xì)胞懸浮液，緩緩加入T25 或T75 flask 內(nèi)之培養(yǎng)基， 混 合均勻，放入37 °C，5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

培養(yǎng)步驟：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1、對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞，*脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。

2、對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，進(jìn)行離心收集，1000RPM條件下離心8-10分鐘，去除上清，按凍存數(shù)量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。

PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。

上海琛藝是一家專業(yè)從事細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)產(chǎn)品的公司，擁有獨(dú)立細(xì)胞房（可隨時(shí)約定參觀），供應(yīng)胎牛血清，STR鑒定細(xì)胞，感受態(tài)細(xì)胞等，專業(yè)，專注，性價(jià)比高，是您Shou選之家。