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數(shù)字PCR快速定量移植受體中的供體DNA

來源:甘肅瑞德生物科技有限公司   2021年09月28日 09:23  

背景:來自移植受者循環(huán)中移植物的無細(xì)胞DNA(cfDNA)是排斥反應(yīng)的潛在生物標(biāo)志物。通過使用微陣列和供體和受體DNA的大規(guī)模平行測序,在維持階段的心臟移植后研究了其有用性。這些方法的缺點(diǎn)是成本高,周轉(zhuǎn)時(shí)間長,需要供體DNA。因此,我們尋求使用數(shù)字微滴PCR(ddPCR)開發(fā)快速且經(jīng)濟(jì)有效的方法。

方法:從肝(LTx,n=10)、腎(KTx,n=9)和心臟(HTx,n=8)移植后的穩(wěn)定受者和7例LTx后直接入院的患者采集血漿。已知的單核苷酸多態(tài)性具有較高的等位基因頻率,共建立了41種水解探針分析方法。血漿cfDNA預(yù)擴(kuò)增,然后用傳統(tǒng)的實(shí)時(shí)熒光PCR方法確定信息(異源)SNP,然后用ddPCR對(duì)嫁接衍生cfDNA(GcfDNA)進(jìn)行定量(百分比)。

結(jié)果:平均回收率為94%(SD,13%),不精密度為4%~14%。緩解組GcfDNA分別為<6.8%(LTx)、2.5%(KTx)和3.4%(HTx)。在LTx當(dāng)天,GcfDNA大約為90%,到第10天,無并發(fā)癥LTX接受者的GcfDNA為<15%。在2例經(jīng)活檢證實(shí)的排斥反應(yīng)患者中,GcfDNA升高到60%,而在1例膽汁淤積癥患者中未發(fā)現(xiàn)GcfDNA升高。

結(jié)論:開發(fā)了一種新的、經(jīng)濟(jì)有效的、快速的技術(shù)來定量移植受者的GcfDNA。這項(xiàng)技術(shù)體現(xiàn)了一種有希望的、潛在的通用生物標(biāo)記物,用于早期檢測排斥反應(yīng),這可能使更有效的治療干預(yù)成為可能。


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