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蛋白純化折騰半個(gè)月沒(méi)結(jié)果,快放假了老板才把原因告訴我!

來(lái)源:上海嘉鵬   2021年09月28日 10:34  
眼瞅著十一假期越來(lái)越近,原本計(jì)劃做好實(shí)驗(yàn)放飛自我,數(shù)據(jù)卻一直出不來(lái),別人做蛋白純化幾天搞定,我做蛋白純化只能靠手動(dòng),半個(gè)月反反復(fù)復(fù)結(jié)果依舊讓人...
只好請(qǐng)教老板,如何快速搞定蛋白純化實(shí)驗(yàn)(文末有法寶,親測(cè)管用?。。。?br />

我:「老師,我選擇的是凝膠過(guò)濾色譜法,我的目標(biāo)蛋白電荷密度并不高,上樣的量也不大,但分辨率就是不高,而且有好多成分我還是想回收一下但做不到。 」

老師:「分辨率不高這個(gè)問(wèn)題,首先樣品與洗脫料液比應(yīng)該保持一致,其次要再檢查一下色譜柱裝填是否勻?qū)?/span>了,這些都會(huì)影響分辨率。層析液全收集這個(gè)事兒是這樣,咱現(xiàn)在的儀器通路是有限的,只能收集這么多,你就盡量挑你關(guān)注的來(lái)吧?!?/p>

 

 

我:「行吧,那實(shí)驗(yàn)過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象,這個(gè)是什么原因呢?」

老師:「有可能是你實(shí)驗(yàn)的蛋白自身不穩(wěn)定,需要檢查緩沖體系是否適宜,環(huán)境是否溫度太高,你可以加入肌氨酸鈉,迅速使蛋白變性,渾濁現(xiàn)象會(huì)消除?!?/p>

 

 

我:「老師,還有,還有問(wèn)題,這個(gè)儀器鎳柱好像堵了,每次開(kāi)機(jī)要啟動(dòng)好久,基線(xiàn)還漂移的很過(guò)分,平衡的時(shí)間越來(lái)越久,一上午都耗在等機(jī)子上了。」

老師:「這個(gè)機(jī)器的鎳柱是剛換的,如果你樣品雜質(zhì)顆粒處理的比較好,液料比也合適的話(huà),就要看純化上清時(shí)蛋白質(zhì)有沒(méi)有產(chǎn)生絮狀沉淀,盡快加入 DTT 還原。至于基線(xiàn)花長(zhǎng)時(shí)間都不平的問(wèn)題啊,同學(xué)們給我反映很多次了,但儀器用的太久了,我也很無(wú)奈?!?/p>

 

 

我:「老師,我以前一直以為是我沒(méi)有找到軟件,怎么自動(dòng)換算 AU 值,結(jié)果發(fā)現(xiàn)大家都是手動(dòng)自己算的?!?/p>

老師:「咱的這臺(tái)儀器都『老當(dāng)益壯』這么久了,電腦也卡,啟動(dòng)也慢,啥都得手動(dòng),但是換一臺(tái)全自動(dòng)進(jìn)口的實(shí)在是太貴,公共實(shí)驗(yàn)室地方緊緊巴巴,便宜一點(diǎn)的吧,全是手動(dòng)也不劃算,跟學(xué)院申請(qǐng)了很多次了,經(jīng)費(fèi)也有限,確實(shí)挺為難的?!?/p>

 

 

我:老師還是厲害啊,但是 3 天要搞定實(shí)驗(yàn),實(shí)在有點(diǎn)為難,要如何才能搞定呢?

老師:雖然我平時(shí)扣扣搜搜的,那也是沒(méi)辦法,這次我給你們特別準(zhǔn)備了一臺(tái)全自動(dòng)蛋白純化儀,*你們?nèi)粘J褂茫瑒偃纬R?guī)蛋白純化~

 

 

我:全自動(dòng)!??!

老師:你趕緊掃下二維碼去試用吧,用的好就買(mǎi),這臺(tái)儀器費(fèi)用還可以,為師還有些經(jīng)費(fèi)能支持。
 

 這臺(tái)能入我老板法眼的蛋白純化儀究竟有何來(lái)歷:

Blupadstart 蛋白純化系統(tǒng),小巧緊湊的一體化設(shè)計(jì),能夠開(kāi)展各種常用的純化技術(shù),如親和層析、離子交換層析、脫鹽和緩沖液交換,以及凝膠過(guò)濾,通過(guò) Blupadstart、預(yù)定義模板或自定義方法實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)多蛋白純化,操作界面簡(jiǎn)潔,流程直觀(guān),滿(mǎn)足科研需求的同時(shí)讓一切簡(jiǎn)單起來(lái):

  • 開(kāi)機(jī)即可檢測(cè):緊湊型一體機(jī),配備高清 10.1 寸觸摸屏點(diǎn)擊運(yùn)行,開(kāi)機(jī)基線(xiàn)即可平衡,無(wú)需預(yù)熱;

  • 檢測(cè)靈敏:標(biāo)配 260/280 mm 固定波長(zhǎng),5 萬(wàn)小時(shí)壽命 LED 冷光源,步進(jìn)電機(jī)程序控制檢測(cè)系統(tǒng);

  • 軟件功能強(qiáng)大:中英文操作界面可互換,UV、梯度譜線(xiàn)、溫度電導(dǎo)率、收集試管號(hào)同屏幕顯示,可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè),范圍廣、精度高,并可進(jìn)行補(bǔ)償;

  • 獨(dú)立運(yùn)行的餾分收集器:XY 軸模式,支持全收,按峰收集,美國(guó)進(jìn)口進(jìn)樣閥和三通收集閥,支持 Load、Inject、Waste 功能;

  • 實(shí)時(shí)修改運(yùn)行參數(shù):高精度恒流泵系統(tǒng),可提供連續(xù)、穩(wěn)定的精準(zhǔn)流速(流速范圍 0.1~10 mL/min,最大耐壓壓力 3bar),支持實(shí)時(shí)在線(xiàn)修改梯度和流速;

  • 兼容所有層析填料Size Exclusion(SEC)-分子篩、凝膠過(guò)濾,(HIC和RP)-疏水和反相均可適應(yīng)

  • 數(shù)據(jù)實(shí)時(shí)保存:實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持 Excel 導(dǎo)出,實(shí)時(shí)自動(dòng)保存,可防止意外斷電導(dǎo)致的數(shù)據(jù)丟失。

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