高效液相色譜（HPLC）法是以高壓下的液體為流動(dòng)相，并采用顆粒極細(xì)的高效固定相的柱色譜分離技術(shù)。高效液相色譜儀系統(tǒng)主要由貯液瓶、泵、進(jìn)樣器、柱子、柱溫箱、檢測(cè)器、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。檢測(cè)器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測(cè)的信號(hào)。

高效液相色譜常用的檢測(cè)器有紫外檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器和熒光檢測(cè)器三種。

1、紫外檢測(cè)器

該檢測(cè)器適用于對(duì)紫外光（或可見(jiàn)光）有吸收性能樣品的檢測(cè)。其特點(diǎn)是，使用面廣（如蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用）、靈敏度高（檢測(cè)下限為10-10g/ml）、線性范圍寬、對(duì)溫度和流速變化不敏感、可檢測(cè)梯度溶液洗脫的樣品。

2、示差折光檢測(cè)器

凡具有與流動(dòng)相折光率不同的樣品組分，均可使用示差折光檢測(cè)器檢測(cè)。目前，糖類(lèi)化合物的檢測(cè)大多使用此檢測(cè)系統(tǒng)。這一系統(tǒng)通用性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單，但靈敏度低（檢測(cè)下限為10-7g/ml），流動(dòng)相的變化會(huì)引起折光率的變化，因此，它既不適用于痕量分析，也不適用于梯度洗脫樣品的檢測(cè)。

3、熒光檢測(cè)器

凡具有熒光的物質(zhì)，在一定條件下，其發(fā)射光的熒光強(qiáng)度與物質(zhì)的濃度成正比。因此，這一檢測(cè)器只適用于具有熒光的有機(jī)化合物（如多環(huán)芳烴、氨基酸、胺類(lèi)、維生素和某些蛋白質(zhì)等）的測(cè)定，其靈敏度很高（檢測(cè)下限為10-12～10-14g/ml），痕量分析和梯度洗脫樣品的檢測(cè)均可采用。

 

HPLC常用的檢測(cè)器是紫外檢測(cè)器。在日常使用過(guò)程中紫外檢測(cè)器主要需要注意檢測(cè)池和氘燈的使用與維護(hù)。

1、檢測(cè)池：檢測(cè)池長(zhǎng)時(shí)間使用可能會(huì)造成污染，如果儀器的參比能量(REF ENERGY)正常，測(cè)量能量(SMPENERGY)偏低，可能為檢測(cè)池污染導(dǎo)致，可以對(duì)檢測(cè)池進(jìn)行清洗。

對(duì)檢測(cè)池零件的進(jìn)行清洗，一般先采用約1：4的硝酸溶液超聲清洗，分別用純水和甲醇溶液清洗，然后重新組裝并將檢測(cè)池池體推進(jìn)池腔內(nèi)，擰緊池板螺絲。注意組裝中，池玻璃及墊片一定要放正，以免壓碎池玻璃，造成檢測(cè)池泄漏。

2、氘燈：氘燈正常使用壽命可在1500小時(shí)以上。燈的使用壽命與檢測(cè)器的使用時(shí)間和開(kāi)啟頻率有關(guān)，因此使用過(guò)程中應(yīng)盡量節(jié)省不必要的開(kāi)機(jī)時(shí)間，減少開(kāi)關(guān)頻率，以延長(zhǎng)氘燈的使用壽命。

如果地判斷出氘燈已經(jīng)不能點(diǎn)亮或能量太低，則需要更換新的氘燈。在購(gòu)買(mǎi)氘燈時(shí)，應(yīng)注意咨詢和核對(duì)氘燈的型號(hào)與儀器型號(hào)是否匹配。更換到氘燈時(shí)，參照儀器說(shuō)明書(shū)中的相關(guān)內(nèi)容，特別要注意氘燈連接線的位置順序。