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生物打印協(xié)議GelXA LAMININK

來源:上海跡亞國際商貿(mào)有限公司   2021年10月15日 16:15  

這是一個建議的程序,請根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行調(diào)整。保持產(chǎn)品的無菌性,在無菌條件下工作。

 

協(xié)議目標(biāo)

該協(xié)議的目的是提供使用 INKREDIBLE、INKREDIBLE+、BIO X  BIO X6  GelXA LAMININK 生物墨水進(jìn)行生物打印的說明,有無細(xì)胞。 GelXA LAMININK 系列包括GelXA LAMININK 111 、GelXA LAMININK 121 、GelXA LAMININK 411 、GelXA

LAMININK 521  GelXA LAMININK+。 本文件涵蓋了與細(xì)胞的預(yù)打印混合、3D 打印和離子交聯(lián)或通過光固化的后打印過程。 該方案針對 GelXA LAMININK 進(jìn)行了優(yōu)化,其中 LAP 0.25% 未稀釋以及 10+1 細(xì)胞懸液稀釋。 改變LAP  bioink 的濃度與細(xì)胞懸浮液的比例會改變光交聯(lián)時(shí)間。 參考光交聯(lián)優(yōu)化協(xié)議來調(diào)整和確定這些數(shù)。 該協(xié)議通過使用 BIO X  BIO X6 的溫控打印頭進(jìn)行了優(yōu)化。 1

 

 所需材料

GelXA LAMININK Bioink*

交聯(lián)劑*bioink采購一起提供

紫外線屏蔽盒,3cC*

無菌錐形生物打印噴嘴,22-27g推薦*

BioX*、BioX6*Inkredable系列*3D Bioprinter

井板或培養(yǎng)皿*

用于光固化的405365納米光模塊

細(xì)胞+細(xì)胞培養(yǎng)基

3毫升帶Luer鎖連接的注射器

/陰路厄鎖適配器*

細(xì)胞混合器*

  

 如果從橙色防紫外線墨盒轉(zhuǎn)印,請保持生物墨水不受光影響,以避免在打印前交聯(lián)。在黑暗模式下使用3D打印機(jī)。光引發(fā)劑對反復(fù)或長時(shí)間暴露于熱敏感。


協(xié)議

使用BIO XBIO X6,在15°C下冷卻打印床,在24°C下溫控打印頭時(shí),該協(xié)議工作*佳。GelXA層狀油墨也可以使用氣動打印頭或可噴墨系列進(jìn)行擠壓,但如果環(huán)境溫度超過25°C且打印頭發(fā)熱,則形狀保真度會降低。如果使用可噴墨系列,打印基材如培養(yǎng)皿或孔板應(yīng)放置在冰上或另一個冷卻的表面上,以便在打印后熱凝膠結(jié)構(gòu),然后再進(jìn)行光交聯(lián)。

 

步驟

標(biāo)題

材料

說明

1

準(zhǔn)備生物墨水

- GelXA LAMININK

如果不使用單元格打印,則直接轉(zhuǎn)到第 3 步。

- 在墨盒/注射器中加熱 GelXA LAMININK

     

37°C 下保持 10 分鐘。 GelXA LAMININK 的加熱可以在氣動打印頭、水浴或培養(yǎng)箱中進(jìn)行。 長時(shí)間和重

復(fù)加熱會對光引發(fā)劑的穩(wěn)定性和生物墨水的均勻性產(chǎn)

     

生負(fù)面影響,需要在添加細(xì)胞之前進(jìn)行額外的混合。如果不在墨盒中使用整個 3 mL bioink,請使用女性

/女性 Luer 鎖適配器將所需的量轉(zhuǎn)移到注射器中,并在最佳存儲條件下保留其余的 bioink。

     

注意:如果 bioink 中有氣泡,請?jiān)?/span> 1600 rpm 下快速離心 1.5 分鐘。

2

GelXA LAMININ

K 與細(xì)胞混合

 

細(xì)胞懸液

細(xì)胞混合

/母魯爾鎖適配器

Luer  接 的 3 mL 注射器

預(yù)熱的GelXA LAMININK

 

此時(shí),將十份bioink 與一份細(xì)胞懸液混合,注意不要將氣泡引入混合物中。有關(guān)詳細(xì)說明,請參閱Mixing Cells Protocol GelX 系列。

使用母/Luer 鎖適配器將細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移到 1 mL 細(xì)胞注射器1 部分。

使用母/Luer 鎖接頭將GelXA LAMININK 轉(zhuǎn)移到 12 mL 射器2 部分。

將兩個注射器夾在分配裝置上3 部分。

將兩個注射器連接到混合裝置4 部分),然后將空藥5 部分從另一側(cè)連接到混合裝置。

在分配裝置上輕輕施加壓力,將兩個注射器的內(nèi)容物混合到空藥筒中。

注意:為避免在混合bioink 和細(xì)胞懸浮液時(shí)出現(xiàn)氣隙,請?jiān)?/span>將注射器與細(xì)胞懸浮液連接之前小心地用 GelXA LAMININK 預(yù)填充Luer 鎖適配器。

如果準(zhǔn)備 <2 mL  GelXA LAMININK,建議連接兩個 3 mL 魯爾鎖注射器,并在注射器之間來回混合bioink,直到它變得均勻。

3

冷卻并裝入墨盒

 

紫外線屏蔽zi彈,3CC 裝入格爾克薩 層壓

及 細(xì)胞)

無菌錐形生物打印 噴嘴, 22- 27g

 

將墨盒放置在%1的計(jì)數(shù)器上0-20分鐘到觸 房間 溫度。 如果 這個 生物墨水 有 被預(yù)熱后, 罐頭 取而代之的是 是 放置 在 a 冰箱對于 3-5分鐘,或在溫度控制下 打印頭 在24°C 對于 5 分鐘數(shù) 對于 更快 冷卻。

注: 房間 溫度 是 在內(nèi)部 20-25°C。

將室溫回火的GelXA層狀油墨放入 打印頭和帶有打印噴嘴的帽。如果 使用 這個 生物X 生物 X6 預(yù)冷這個打印床至 15°C

     

注意:使用GelXA LAMININK打印時(shí), 推薦 打印頭 溫度 對于 這個高 打印 保真度 是 20- 25°C, 雖然 這個生物墨水 罐頭 是 分配 向上

32°C。

4

打印

 

 

生物穿孔結(jié)構(gòu)與參數(shù) 根據(jù) 至表1。如果打印適性不理想,請調(diào)整壓力上升/下降1 kPa以擠出更多/更少 材料。

如果打印頭在長時(shí)間打印過程中發(fā)熱 會議或環(huán)境溫度超過25°C, 生物墨水也會加熱到25°C以上 粘度降低,當(dāng)擠出時(shí)觀察到 即使在低壓下也有很厚的細(xì)絲。在這里面凱斯, 復(fù) 臺階 3  返回 至 這個 溫度范圍 對于 好打印適性。

 

注意:如果擠壓間隔時(shí)間過長 生物墨水 罐頭 干 在 這個 噴嘴 造成 它 至 木屐。 如果 這個發(fā)生, 替換 與 新建 噴嘴。

   

- 生物穿孔器

BIO XBIO

X6 可墨水

   

系列)

   

- 板材 或

Petri 碟子

 

1.使用稀釋/未稀釋生物油墨在20-25°C下打印連續(xù)長絲的建議最小擠壓壓力**(±2 kPa)。稀釋假設(shè)一份PBS到十份bioink的混合物,這是對bioink和細(xì)胞懸浮液混合條件的模擬。對于較小的稀釋度,壓力需要增加到用于未稀釋生物墨水的壓力。

image.png

**這只是推薦的啟動壓力參考值。所需的實(shí)際壓力將根據(jù)制備程序(生物墨水的量和生物墨水的實(shí)際溫度)以及活塞在墨盒中的安裝和打印表面的平整度而變化。該表是在打印頭溫度為24°C和使用PBS稀釋10+1生物墨水的情況下生成的。

步驟

標(biāo)題

材料

說明

5

交聯(lián)

 

交聯(lián)劑和/

用于光固化的405 365 nm 光模塊

細(xì)胞培養(yǎng)基

 

GelXA層狀油墨可以使用以下方法進(jìn)行光交聯(lián) 405 365 納米 光 模塊 或 離子地用CaCl交聯(lián)2-含交聯(lián) 探員。 如果 使用 兩者都有, 與 光交聯(lián)。光交聯(lián) 僅限 威爾 生成 a 較硬 結(jié)果比 離子型 交聯(lián) 只有。

 

光交聯(lián): 參見 表 2 下面 對于 推薦交聯(lián)時(shí)間。確保 生物打印GelXA層狀連接構(gòu)建體是在打印后通過冷卻 打印床如果使用BIO X BIO X6) 放置 這個 打印 基材 與 這個在冰上構(gòu)造10如果使用 可噴墨系列。如果光交聯(lián)過程中 生物打印, 設(shè)置 這個 交聯(lián)參數(shù)適當(dāng)?shù)?/span> 在 這個 G 對于 這個 可噴墨系列或打印頭設(shè)置頁面 對于 這個 生物 X  X6.

 

注意:建議使用405納米光模塊 取而代之的是 365 納米 一個 如果 有可能。 過度曝光 可能損壞 這個 細(xì)胞。

 

注: 至 驗(yàn)證 這個 交聯(lián) 是 足夠, 添加 37°C 媒體 一個 打印 嗯 而且 觀察 那個它 不 溶解。

離子型 交聯(lián): 淹沒 這個 充滿細(xì)胞的交聯(lián)溶液中的結(jié)構(gòu)物30 秒到5分鐘,具體取決于結(jié)構(gòu) 大小。除去交聯(lián)液并沖洗 構(gòu)造 與 基礎(chǔ)的文化 媒體 一次。

2.建議的構(gòu)建光交聯(lián)時(shí)間***。使用BIO XBIO X6光固化模塊將每個光模塊的距離設(shè)置為5厘米。如果使用可噴墨系列光固化模塊,所需時(shí)間可能會減少。用其他參數(shù)交聯(lián),見光交聯(lián)優(yōu)化協(xié)議。該表是使用GelXA LAMININK與間充質(zhì)干細(xì)胞生成的。使用細(xì)胞打印時(shí),曝光時(shí)間不要超過120秒。為了在打印較厚的構(gòu)造時(shí)達(dá)到最佳的結(jié)構(gòu)完整性,建議每隔4層用365/405nm光施加3/5秒的光交聯(lián)。若在25°C以上使用bioink,每隔一層用365/405nm的光進(jìn)行3/5s的光交聯(lián),效guo好。

 

365牛米,搭接

0.25%

405牛米,搭接

0.25%

施工深度(mm)/時(shí)間(s)

1/5

1/10

3/20

3/30

***這只是一個推薦的參考交聯(lián)時(shí)間開始。交聯(lián)所需的實(shí)際時(shí)間將根據(jù)結(jié)構(gòu)物的尺寸和溫度以及光固化模塊的強(qiáng)度和到結(jié)構(gòu)物的距離而變化。

臺階

標(biāo)題

材料

說明

6

孵化

-細(xì)胞培養(yǎng)基

 

交聯(lián)后,將所需介質(zhì)加入構(gòu)造 而且 地點(diǎn) 他們 一個 孵化器。

在細(xì)胞培養(yǎng)基中孵育構(gòu)建物 標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)條件

(37°C,5%CO2而且95% 相對的 濕度) 或根據(jù) 至 應(yīng)用程序。

 

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