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生物打印協(xié)議GelXA LAMININK

來源:上海跡亞國際商貿(mào)有限公司   2021年10月15日 16:15  

這是一個建議的程序,請根據(jù)你的實驗需要進行調(diào)整。保持產(chǎn)品的無菌性,在無菌條件下工作。

 

協(xié)議目標

該協(xié)議的目的是提供使用 INKREDIBLEINKREDIBLE+、BIO X  BIO X6  GelXA LAMININK 生物墨水進行生物打印的說明,有無細胞。 GelXA LAMININK 系列包括GelXA LAMININK 111 、GelXA LAMININK 121 、GelXA LAMININK 411 、GelXA

LAMININK 521  GelXA LAMININK+ 本文件涵蓋了與細胞的預打印混合、3D 打印和離子交聯(lián)或通過光固化的后打印過程。 該方案針對 GelXA LAMININK 進行了優(yōu)化,其中 LAP 0.25% 未稀釋以及 10+1 細胞懸液稀釋。 改變LAP  bioink 的濃度與細胞懸浮液的比例會改變光交聯(lián)時間。 參考光交聯(lián)優(yōu)化協(xié)議來調(diào)整和確定這些數(shù)。 該協(xié)議通過使用 BIO X  BIO X6 的溫控打印頭進行了優(yōu)化。 1

 

 所需材料

GelXA LAMININK Bioink*

交聯(lián)劑*bioink采購一起提供

紫外線屏蔽盒,3cC*

無菌錐形生物打印噴嘴,22-27g推薦*

BioX*、BioX6*Inkredable系列*3D Bioprinter

井板或培養(yǎng)皿*

用于光固化的405365納米光模塊

細胞+細胞培養(yǎng)基

3毫升帶Luer鎖連接的注射器

/陰路厄鎖適配器*

細胞混合器*

  

 如果從橙色防紫外線墨盒轉印,請保持生物墨水不受光影響,以避免在打印前交聯(lián)。在黑暗模式下使用3D打印機。光引發(fā)劑對反復或長時間暴露于熱敏感。


協(xié)議

使用BIO XBIO X6,在15°C下冷卻打印床,在24°C下溫控打印頭時,該協(xié)議工作*佳。GelXA層狀油墨也可以使用氣動打印頭或可噴墨系列進行擠壓,但如果環(huán)境溫度超過25°C且打印頭發(fā)熱,則形狀保真度會降低。如果使用可噴墨系列,打印基材如培養(yǎng)皿或孔板應放置在冰上或另一個冷卻的表面上,以便在打印后熱凝膠結構,然后再進行光交聯(lián)。

 

步驟

標題

材料

說明

1

準備生物墨水

- GelXA LAMININK

如果不使用單元格打印,則直接轉到第 3 步。

- 在墨盒/注射器中加熱 GelXA LAMININK

     

37°C 下保持 10 分鐘。 GelXA LAMININK 的加熱可以在氣動打印頭、水浴或培養(yǎng)箱中進行。 長時間和重

復加熱會對光引發(fā)劑的穩(wěn)定性和生物墨水的均勻性產(chǎn)

     

生負面影響,需要在添加細胞之前進行額外的混合。如果不在墨盒中使用整個 3 mL bioink,請使用女性

/女性 Luer 鎖適配器將所需的量轉移到注射器中,并在最佳存儲條件下保留其余的 bioink。

     

注意:如果 bioink 中有氣泡,請在 1600 rpm 下快速離心 1.5 分鐘。

2

GelXA LAMININ

K 與細胞混合

 

細胞懸液

細胞混合

/母魯爾鎖適配器

Luer  接 的 3 mL 注射器

預熱的GelXA LAMININK

 

此時,將十份bioink 與一份細胞懸液混合,注意不要將氣泡引入混合物中。有關詳細說明,請參閱Mixing Cells Protocol GelX 系列。

使用母/Luer 鎖適配器將細胞懸浮液轉移到 1 mL 細胞注射器1 部分。

使用母/Luer 鎖接頭將GelXA LAMININK 轉移到 12 mL 射器2 部分

將兩個注射器夾在分配裝置上3 部分。

將兩個注射器連接到混合裝置4 部分),然后將空藥5 部分從另一側連接到混合裝置。

在分配裝置上輕輕施加壓力,將兩個注射器的內(nèi)容物混合到空藥筒中。

注意:為避免在混合bioink 和細胞懸浮液時出現(xiàn)氣隙,請在將注射器與細胞懸浮液連接之前小心地用 GelXA LAMININK 預填充Luer 鎖適配器。

如果準備 <2 mL  GelXA LAMININK,建議連接兩個 3 mL 魯爾鎖注射器,并在注射器之間來回混合bioink,直到它變得均勻。

3

冷卻并裝入墨盒

 

紫外線屏蔽zi彈,3CC 裝入格爾克薩 層壓

及 細胞)

無菌錐形生物打印 噴嘴, 22- 27g

 

將墨盒放置在%1的計數(shù)器上0-20分鐘到觸 房間 溫度。 如果 這個 生物墨水 有 被預熱后, 罐頭 取而代之的是 是 放置 在 a 冰箱對于 3-5分鐘,或在溫度控制下 打印頭 在24°C 對于 5 分鐘數(shù) 對于 更快 冷卻。

注: 房間 溫度 是 在內(nèi)部 20-25°C

將室溫回火的GelXA層狀油墨放入 打印頭和帶有打印噴嘴的帽。如果 使用 這個 生物X 生物 X6 預冷這個打印床至 15°C。

     

注意:使用GelXA LAMININK打印時, 推薦 打印頭 溫度 對于 這個高 打印 保真度 是 20- 25°C, 雖然 這個生物墨水 罐頭 是 分配 向上

32°C

4

打印

 

 

生物穿孔結構與參數(shù) 根據(jù) 至表1。如果打印適性不理想,請調(diào)整壓力上升/下降1 kPa以擠出更多/更少 材料。

如果打印頭在長時間打印過程中發(fā)熱 會議或環(huán)境溫度超過25°C, 生物墨水也會加熱到25°C以上 粘度降低,當擠出時觀察到 即使在低壓下也有很厚的細絲。在這里面凱斯, 臺階 3  返回 至 這個 溫度范圍 對于 好打印適性。

 

注意:如果擠壓間隔時間過長 生物墨水 罐頭 干 在 這個 噴嘴 造成 它 至 木屐。 如果 這個發(fā)生, 替換 與 新建 噴嘴。

   

- 生物穿孔器

BIO X、BIO

X6 可墨水

   

系列)

   

- 板材 或

Petri 碟子

 

1.使用稀釋/未稀釋生物油墨在20-25°C下打印連續(xù)長絲的建議最小擠壓壓力**(±2 kPa)。稀釋假設一份PBS到十份bioink的混合物,這是對bioink和細胞懸浮液混合條件的模擬。對于較小的稀釋度,壓力需要增加到用于未稀釋生物墨水的壓力。

image.png

**這只是推薦的啟動壓力參考值。所需的實際壓力將根據(jù)制備程序(生物墨水的量和生物墨水的實際溫度)以及活塞在墨盒中的安裝和打印表面的平整度而變化。該表是在打印頭溫度為24°C和使用PBS稀釋10+1生物墨水的情況下生成的。

步驟

標題

材料

說明

5

交聯(lián)

 

交聯(lián)劑和/

用于光固化的405 365 nm 光模塊

細胞培養(yǎng)基

 

GelXA層狀油墨可以使用以下方法進行光交聯(lián) 405 365 納米 光 模塊 或 離子地用CaCl交聯(lián)2-含交聯(lián) 探員。 如果 使用 兩者都有, 與 光交聯(lián)。光交聯(lián) 僅限 威爾 生成 a 較硬果比 離子型 交聯(lián) 只有。

 

光交聯(lián): 參見 表 2 下面 對于 推薦交聯(lián)時間。確保 生物打印GelXA層狀連接構建體是在打印后通過冷卻 打印床如果使用BIO X BIO X6) 放置 這個 打印 基材 與 這個在冰上構造10如果使用 可噴墨系列。如果光交聯(lián)過程中 生物打印, 設置 這個 交聯(lián)參數(shù)適當?shù)?/span> 在 這個 G 對于 這個 可噴墨系列或打印頭設置頁面 對于 這個 生物 X  X6.

 

注意:建議使用405納米光模塊 取而代之的是 365 納米 一個 如果 有可能。 過度曝光 可能損壞 這個 細胞。

 

注: 至 驗證 這個 交聯(lián) 是 足夠, 添加 37°C 媒體 一個 打印 嗯 而且 觀察 那個它 不 溶解。

離子型 交聯(lián): 淹沒 這個 充滿細胞的交聯(lián)溶液中的結構物30 秒到5分鐘,具體取決于結 大小。除去交聯(lián)液并沖洗 構造 與 基礎的文化 媒體 一次。

2.建議的構建光交聯(lián)時間***。使用BIO XBIO X6光固化模塊將每個光模塊的距離設置為5厘米。如果使用可噴墨系列光固化模塊,所需時間可能會減少。用其他參數(shù)交聯(lián),見光交聯(lián)優(yōu)化協(xié)議。該表是使用GelXA LAMININK與間充質干細胞生成的。使用細胞打印時,曝光時間不要超過120秒。為了在打印較厚的構造時達到最佳的結構完整性,建議每隔4層用365/405nm光施加3/5秒的光交聯(lián)。若在25°C以上使用bioink,每隔一層用365/405nm的光進行3/5s的光交聯(lián),效guo好。

 

365牛米,搭接

0.25%

405牛米,搭接

0.25%

施工深度(mm)/時間(s)

1/5

1/10

3/20

3/30

***這只是一個推薦的參考交聯(lián)時間開始。交聯(lián)所需的實際時間將根據(jù)結構物的尺寸和溫度以及光固化模塊的強度和到結構物的距離而變化。

臺階

標題

材料

說明

6

孵化

-細胞培養(yǎng)基

 

交聯(lián)后,將所需介質加入構造 而且 地點 他們 一個 孵化器。

在細胞培養(yǎng)基中孵育構建物 標準培養(yǎng)條件

(37°C,5%CO2而且95% 相對的 濕度) 或根據(jù) 至 應用程序。

 

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