1

準(zhǔn)備生物墨水

- GelXA LAMININK

如果不使用單元格打印，則直接轉(zhuǎn)到第 3 步。

- 在墨盒/注射器中加熱 GelXA LAMININK

在 37°C 下保持 10 分鐘。 GelXA LAMININK 的加熱可以在氣動(dòng)打印頭、水浴或培養(yǎng)箱中進(jìn)行。 長(zhǎng)時(shí)間和重

復(fù)加熱會(huì)對(duì)光引發(fā)劑的穩(wěn)定性和生物墨水的均勻性產(chǎn)

生負(fù)面影響，需要在添加細(xì)胞之前進(jìn)行額外的混合。如果不在墨盒中使用整個(gè) 3 mL 的 bioink，請(qǐng)使用女性

/女性 Luer 鎖適配器將所需的量轉(zhuǎn)移到注射器中，并在最佳存儲(chǔ)條件下保留其余的 bioink。

注意：如果 bioink 中有氣泡，請(qǐng)?jiān)?/span> 1600 rpm 下快速離心 1.5 分鐘。

2

將 GelXA LAMININ

K 與細(xì)胞混合

- 細(xì)胞懸液

- 細(xì)胞混合器

- 母/母魯爾鎖適配器

- 帶 Luer 鎖連 接 的 3 mL 注射器

- 預(yù)熱的GelXA LAMININK

此時(shí)，將十份bioink 與一份細(xì)胞懸液混合，注意不要將氣泡引入混合物中。有關(guān)詳細(xì)說(shuō)明，請(qǐng)參閱Mixing Cells Protocol GelX 系列。

- 使用母/母Luer 鎖適配器將細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移到 1 mL 細(xì)胞注射器（第1 部分）。

- 使用母/母Luer 鎖接頭將GelXA LAMININK 轉(zhuǎn)移到 12 mL 注射器（第2 部分）。

- 將兩個(gè)注射器夾在分配裝置上（第3 部分）。

- 將兩個(gè)注射器連接到混合裝置（第4 部分），然后將空藥筒（第5 部分）從另一側(cè)連接到混合裝置。

- 在分配裝置上輕輕施加壓力，將兩個(gè)注射器的內(nèi)容物混合到空藥筒中。

注意：為避免在混合bioink 和細(xì)胞懸浮液時(shí)出現(xiàn)氣隙，請(qǐng)?jiān)?/span>將注射器與細(xì)胞懸浮液連接之前小心地用 GelXA LAMININK 預(yù)填充Luer 鎖適配器。

如果準(zhǔn)備 <2 mL 的 GelXA LAMININK，建議連接兩個(gè) 3 mL 魯爾鎖注射器，并在注射器之間來(lái)回混合bioink，直到它變得均勻。

注意：使用GelXA LAMININK打印時(shí)， 推薦 打印頭 溫度 對(duì)于 這個(gè)高 打印 保真度 是 20- 25°C， 雖然 這個(gè)生物墨水 罐頭 是 分配 向上

至 32°C。

4

打印

- 生物穿孔結(jié)構(gòu)與參數(shù) 根據(jù) 至表1。如果打印適性不理想，請(qǐng)調(diào)整壓力上升/下降1 kPa以擠出更多/更少 材料。

- 如果打印頭在長(zhǎng)時(shí)間打印過(guò)程中發(fā)熱 會(huì)議或環(huán)境溫度超過(guò)25°C， 生物墨水也會(huì)加熱到25°C以上 粘度降低，當(dāng)擠出時(shí)觀察到 即使在低壓下也有很厚的細(xì)絲。在這里面凱斯, 重復(fù) 臺(tái)階 3 至 返回 至 這個(gè) 溫度范圍 對(duì)于 好打印適性。

注意：如果擠壓間隔時(shí)間過(guò)長(zhǎng) 生物墨水 罐頭 干的 在 這個(gè) 噴嘴 造成 它 至 木屐。 如果 這個(gè)發(fā)生, 替換 與 新建 噴嘴。

- 生物穿孔器

（BIO X、BIO

X6或 可墨水

系列）

- 嗯 板材 或

Petri 碟子

5

交聯(lián)

- 交聯(lián)劑和/或

- 用于光固化的405 或 365 nm 光模塊

- 細(xì)胞培養(yǎng)基

GelXA層狀油墨可以使用以下方法進(jìn)行光交聯(lián) 這個(gè) 405 或 365 納米 光 模塊 或 離子地用CaCl交聯(lián)2-含交聯(lián) 探員。 如果 使用 兩者都有, 開始 與 光交聯(lián)。光交聯(lián) 僅限 威爾 生成 a 較硬 結(jié)果比 離子型 交聯(lián) 只有。

- 光交聯(lián)： 參見 表 2 下面 對(duì)于 推薦交聯(lián)時(shí)間。確保 生物打印GelXA層狀連接構(gòu)建體是在打印后通過(guò)冷卻 打印床（如果使用BIO X 或BIO X6)或 放置 這個(gè) 打印 基材 與 這個(gè)在冰上構(gòu)造10秒（如果使用 可噴墨系列）。如果光交聯(lián)過(guò)程中 生物打印, 設(shè)置 這個(gè) 交聯(lián)參數(shù)適當(dāng)?shù)?/span> 在 這個(gè) G碼 對(duì)于 這個(gè) 可噴墨系列或打印頭設(shè)置頁(yè)面 對(duì)于 這個(gè) 生物 X 或 生物 X6.

注意：建議使用405納米光模塊 取而代之的是的 365 納米 一個(gè) 如果 有可能。 過(guò)度曝光 可能損壞 這個(gè) 細(xì)胞。

注： 至 驗(yàn)證 這個(gè) 交聯(lián) 是 足夠, 添加 37°C 媒體至 一個(gè) 打印 嗯 而且 觀察 那個(gè)它 不 溶解。

- 離子型 交聯(lián)： 淹沒(méi) 這個(gè) 充滿細(xì)胞的交聯(lián)溶液中的結(jié)構(gòu)物30 秒到5分鐘，具體取決于結(jié)構(gòu) 大小。除去交聯(lián)液并沖洗 構(gòu)造 與 基礎(chǔ)的文化 媒體 一次。

施工深度(mm)/時(shí)間(s)

1/5

1/10

3/20

3/30

6

孵化

-細(xì)胞培養(yǎng)基

- 交聯(lián)后，將所需介質(zhì)加入構(gòu)造 而且 地點(diǎn) 他們在 一個(gè) 孵化器。

- 在細(xì)胞培養(yǎng)基中孵育構(gòu)建物 標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)條件

(37°C，5%CO2而且95% 相對(duì)的 濕度） 或根據(jù) 至 應(yīng)用程序。