酵母互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)的快速檢測(cè)方法
酵母,一種體內(nèi)模式生物,具有很大的優(yōu)勢(shì)。釀酒酵母,芽殖酵母,是一種單細(xì)胞真核生物。大多數(shù)進(jìn)程,例如轉(zhuǎn)錄,翻譯,蛋白質(zhì)折疊都是保守的,因此酵母是一種非常合適的復(fù)雜哺乳動(dòng)物細(xì)胞的替代品。
與其他模式生物不同,例如大腸桿菌,酵母沒有毒性,而且能表達(dá)完整的膜蛋白。
1996年對(duì)酵母基因組進(jìn)行測(cè)序后,出現(xiàn)了許多用于基因操作的工具。發(fā)明了例如穿梭載體,通過同源重組刪除基因。可以使用具有缺失菌株的大型文庫,輕松設(shè)置功能分析。
酵母互補(bǔ)試驗(yàn),缺失某種蛋白質(zhì)的酵母突變體,通過轉(zhuǎn)基因?qū)⒁粋€(gè)外顯子基因質(zhì)粒轉(zhuǎn)入突變體。此時(shí),這株酵母突變體面對(duì)一種境況,就是這種缺失掉的蛋白質(zhì)功能會(huì)影響它的存活和生長。如果這種缺失型突變體生長出來了,就意味著這種轉(zhuǎn)入的外顯子基因補(bǔ)償了這種缺失基因的功能,使得酵母細(xì)胞能夠正常存活和生長。有一些方法可以檢測(cè)酵母的互補(bǔ)試驗(yàn),比如液體測(cè)量,尿素測(cè)量法,氨測(cè)量法,水份測(cè)量法等。在此,我們介紹一種方法:計(jì)數(shù)酵母的方法。
CellDrop 明場(chǎng)計(jì)數(shù)酵母細(xì)胞:采用*的小細(xì)胞模式,結(jié)合AI算法,準(zhǔn)確計(jì)算酵母細(xì)胞總數(shù)。
不僅如此,采用熒光染料FDA+PI的組合,可以進(jìn)行酵母細(xì)胞的活力檢測(cè)
活性檢測(cè):
活性檢測(cè)即用兩種不同的熒光試劑進(jìn)行染色。Y20.1細(xì)胞,過夜誘導(dǎo),在明場(chǎng)計(jì)數(shù)儀下計(jì)數(shù)5e6 cells/ml. 針對(duì)CellDrop 酵母活性分析(DeNovix)18ul的細(xì)胞懸浮液和1ul的FDA和PI?;旌衔锉芄庀?/span>15min。10ul的混合物側(cè)面peptide入到celldrop中,進(jìn)入yeast app進(jìn)行測(cè)量。
活力檢測(cè)中,應(yīng)用熒光試劑判斷酵母細(xì)胞的死活,將檢測(cè)時(shí)間從5天的尿素檢測(cè)或氨檢測(cè)時(shí)間縮短到了十幾秒。
無需一次性或可重復(fù)利用的計(jì)數(shù)板,CellDrop BF/FL做到絕對(duì)的無耗材,是新一代計(jì)數(shù)儀的代表。
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