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胎牛血清的質(zhì)量要求

來源:武漢尚恩生物技術(shù)有限公司   2021年11月02日 09:47  
  隨著科學技術(shù)的發(fā)展和生活水平的不斷提高對生物醫(yī)藥產(chǎn)品的質(zhì)量要求也越來越高,所以對制備工藝中所涉及到的各種原材料的質(zhì)量標準要求也越來越高,特別是對用于細胞培養(yǎng)基中的主要天然成份――胎牛血清的質(zhì)量要求也不斷提高。牛血清包括胎牛血清、新生牛血清和成牛血清。
 
  (一)、WHO公布的《用動物細胞體外培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品規(guī)程》中的要求:
 
  1. 胎牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家。并應(yīng)具備適當?shù)谋O(jiān)測系統(tǒng)。
 
  2.有些國家還要求牛血清來自未用過反芻動物蛋白飼料的牛群。
 
  3.證明所用牛血清中不含對所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物。
 
  4.血清要通過濾膜過濾除菌,保證無菌。
 
  5.無細菌、霉菌、支原體和病毒的污染,有些國家要求無細菌噬菌體污染。
 
  6.對細胞有良好的支持繁殖作用。
 
  (二)、我國在對牛血清的質(zhì)量2000年版《中國生物制品主要原輔料質(zhì)控標準》中提出比較嚴格的標準要求。包括蛋白質(zhì)含量,細菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細菌內(nèi)毒素,支持細胞增殖檢查。
 
  (三)、美國對牛血清的質(zhì)量要求:Gibco 和Sigma二家主要的美國牛血清供應(yīng)商的牛血清都已進入到我國市場,他們對其質(zhì)量標準要求都極為嚴格,從血清來源到產(chǎn)品質(zhì)量都有明確規(guī)定。
 
  1) 血清來源:可從世界各國收集胎牛血清,但是必須符合他的質(zhì)量標準和美國農(nóng)業(yè)部進口要求。地方當局還不清楚本地是否有牛海綿狀病毒流行的血清不收集,有說明血清質(zhì)量的證明資料:包括收集過程的全部資料、檢驗結(jié)果和交付情況。
 
  2)血清的收集:胎牛血清是心臟穿刺取血,新生牛(10~14天)和小牛(10個月內(nèi))血清靜脈取血。血清采集條件必須符合工業(yè)生產(chǎn)的標準:低溫下采集、一次分離、分離后立即混合凍存。符合要求的血清56℃水浴30分鐘滅活。
 
  3)血清的制備:
 
  a. 超低IgG胎牛血清:通過親和層析工藝去除胎牛血清中的γ球蛋白,使FBS γ球蛋白含量減到*低,一般IgG≤5ug/ml,生物學活性不變。
 
  b. 血清透析:用12000~14000分子量的透析膜在0.15M NaCl中透析直到使葡萄糖含量<0.5mg/ml(用葡萄糖氧化酶/過氧化酶方法測定)。
 
  c. γ-射線照射:已經(jīng)證明γ-射線照射可以有效滅活血清中可能污染的病毒、支原體。照射劑量為30~45KG。而且這個劑量的γ-射線照射不會改變血清的理化性質(zhì)和對細胞培養(yǎng)的影響。
 
  4)除菌過濾:經(jīng)過上述處理的粗制血清再經(jīng)過一系列除菌濾膜過濾包括0.2微米(micron)和0.1微米濾膜。FBS要通過三層0.1微米濾膜,其他血清可通過0.2微米濾膜。

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