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化學發(fā)光分析又稱化學發(fā)光免疫分析(CLIA),是用化學發(fā)光劑直接標記抗原或抗體的免疫分析方法。常用于標記的化學發(fā)光物質有吖啶酯類化合物——acridinium ester(AE),是有效的發(fā)光標記物,其通過起動發(fā)光試劑作用而發(fā)光,強烈的直接發(fā)光在一秒鐘內完成,為快速的閃爍發(fā)光。吖啶酯作為標記物用于免疫分析,其化學反應簡單、快速、無須催化劑;檢測小分子抗原采用競爭法,大分子抗原則采用夾心法,非特異性結合少,本底低;與大分子的結合不會減小所產生的光量,從而增加靈敏度。
化學發(fā)光分析儀發(fā)光酶免疫分析法：
從標記免疫分析角度,化學發(fā)光酶免疫分析(chemi luminescent enzyme immuno assay,CLEIA ),應屬酶免疫分析,只是酶反應的底物是發(fā)光劑,操作步驟與酶免分析*相同:以酶標記生物活性物質(如酶標記的抗原或抗體)進行免疫反應,免疫反應復合物上的酶再作用于發(fā)光底物,在信號試劑作用下發(fā)光,用發(fā)光信號測定儀進行發(fā)光測定。目前常用的標記酶為辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(ALP),它們有各自的發(fā)光底物。
發(fā)光試劑
HRP標記的CLEIA常用的底物為魯米諾(32氨基鄰苯二甲酰肼,luminol),或其衍生物如異魯米諾(42氨基鄰苯二甲酰肼),是一類重要的發(fā)光試劑。魯米諾的氧化反應在堿性緩沖液中進行,在過氧化物酶及活性氧存在下,生成激發(fā)態(tài)中間體,當其回到基態(tài)時發(fā)光,其波長為425nm。
早期用魯米諾直接標記抗原(或抗體),但標記后發(fā)光強度降低而使靈敏度受到影響。近來用過氧化物酶標記抗體,進行免疫反應后利用魯米諾作為發(fā)光底物,在過氧化物酶和起動發(fā)光試劑作用下,魯米諾發(fā)光,發(fā)光強度依賴于酶免疫反應物中酶的濃度。
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