胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)重要的培養(yǎng)基且不可替代,它是采自5-8個月胎齡牛胚胎中的胎血。此時胎牛各臟器正處生長分化階段,血中含有豐富的生長發(fā)育因子,非常適合各種細(xì)胞的培養(yǎng)。
因此,如何在使用過程中保護(hù)這些因子的活性,達(dá)到最大的細(xì)胞培養(yǎng)效果,就需要正確地使用胎牛血清。
正確地使用胎牛血清可分為以下四個方面:
1. 正確儲存,避免反復(fù)凍融
1) 血清在-20°C凍存。
2) 血清避免反復(fù)凍融,以免降低因子活性。如一次用不完,應(yīng)進(jìn)行分裝。
3) 血清和培養(yǎng)基應(yīng)盡可能“現(xiàn)用現(xiàn)配”,配好的培養(yǎng)液,應(yīng)于一周內(nèi)用完。
4)血清避免在4°C或更高溫度靜置過久,否則會破壞血清中有效活性成分,影響血清品質(zhì)。
2. 正確的融化
國際上流行的【血清融化三步法】可最大限度地保存血清中因子的活性,不會產(chǎn)生沉淀,同時能縮短血清融化時間。具體如下:
3. 關(guān)于胎牛血清的滅活
真正的胎牛血清因為胎牛沒有形成有效補(bǔ)體,如果針對補(bǔ)體滅活的話,就不需要。其他情況根據(jù)實驗設(shè)計來決定。
4. 胎牛血清的濃度
胎牛血清通常是以2%~20%的比例加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,混合后配成*培養(yǎng)基。
曾有文獻(xiàn)報道,不同胎牛血清濃度對細(xì)胞存在一定的影響,尤其是干細(xì)胞和原代細(xì)胞。具體最佳濃度需要用戶根據(jù)自己的實驗來確定,以既保證培養(yǎng)的效果,又避免血清的浪費(fèi)。
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