細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)無菌環(huán)境的要求較為嚴(yán)格。微生物污染通常是造成細(xì)胞培養(yǎng)失敗的主要原因，細(xì)胞間的殺菌主要涉及空氣的殺菌，其常見方法如下。

紫外線消毒:

紫外線是一種低能量的電磁輻射，可殺死多種微生物。革蘭陰性 菌最為敏感，其次是陽性菌，再次為芽孢，真菌孢子的抵抗力*。紫外線的直 接作用是通過破壞微生物的核酸及蛋白質(zhì)等而使其滅活， 間接作用是通過紫外線 照射產(chǎn)生的臭氧殺死微生物。直接照射培養(yǎng)室消毒，用法簡(jiǎn)單，效果好。 紫外燈的消毒效果同紫外燈的輻射強(qiáng)度和照射劑量呈正相關(guān)， 輻射強(qiáng)度隨燈距離 增加而降低，照射劑量和照射時(shí)間呈正比。因此紫外燈同被照射物的距離和照射 時(shí)間要適合。離地面 2 米的 30W 燈可照射 9 平方米房間，每天照射 2－3 小時(shí)， 期間可間隔 30 分鐘。燈管離地面 2 米以外要延長(zhǎng)照射時(shí)間，2.5 米照射效果較 差。紫外燈照射工作臺(tái)的距離不應(yīng)超過 1.5 米，照射時(shí)間 30 分鐘為宜。由于上述各種情況的不確定性，導(dǎo)致紫外線殺菌效果不是很理想，一般需要過夜殺菌。此外紫外線對(duì)人體有傷害作用，紫外燈不僅對(duì)皮膚、眼睛傷害，且對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞與試劑等也產(chǎn)生不良影響，因此不要在紫外線燈照射下進(jìn)行操作。

甲醛熏蒸

甲醛是一種高效能化學(xué)滅菌劑。不易燃、不爆炸、不腐蝕金屬。它能與蛋白質(zhì)中的氨基酸結(jié)合而使蛋白變性，使酶的活性消失。故有強(qiáng)大的殺菌作用。一般稱作為“大消”，用來對(duì)細(xì)胞間進(jìn)行*的消毒殺菌。但是甲醛是一種對(duì)人體有害的物質(zhì)，并且細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室一般空氣流通都很差，甲醛的排出也很慢，至少要一周以上。如果要緊急使用的話，在甲醛滅菌完后，可以用等量的氨水中和空氣中的甲醛。

空氣過濾

過濾除菌：是將液體或氣體用微孔薄膜過濾，使大于孔徑的細(xì)菌等微生物顆 粒阻留，從而達(dá)到除菌目的。在體外培養(yǎng)時(shí)，過濾除菌大多用于遇熱容易變性而失效的試劑或培養(yǎng)液。目前，大多實(shí)驗(yàn)室采用微孔濾膜濾器除菌。關(guān)鍵步驟是安裝濾膜及無菌過濾過程。