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蛋白純化系統(tǒng)利用各種蛋白間的相似性來除去非蛋白物質(zhì)的污染
蛋白純化要利用不同蛋白間內(nèi)在的相似性與差異，利用各種蛋白間的相似性來除去非蛋白物質(zhì)的污染，而利用各蛋白質(zhì)的差異將目的蛋白從其他蛋白中純化出來。每種蛋白間的大小、形狀、電荷、疏水性、溶解度和生物學(xué)活性都會有差異，利用這些差異可將蛋白從混合物如大腸桿菌裂解物中提取出來得到重組蛋白。
凝膠層析蛋白純化系統(tǒng)采用高度靈活配置的模塊化設(shè)計(jì)，具有許多優(yōu)點(diǎn)來進(jìn)行快速、靈活、穩(wěn)定的純化。硬件的所有閥門、檢測器和層析柱均面向操作者安裝，方便科研人員清楚、直觀地了解各個模塊之間的關(guān)系和樣品以及緩沖液的流路。將樣品環(huán)上樣改進(jìn)為直接上樣，入口可實(shí)現(xiàn)系統(tǒng)和層析柱的自動清洗?？蒲腥藛T從一個純化任務(wù)轉(zhuǎn)向另一個純化任務(wù)僅僅需要幾分鐘，在保持準(zhǔn)確性和確保重復(fù)性的同時，大大地節(jié)省制備時間。
凝膠層析蛋白純化系統(tǒng)的樣品制備：
1.樣品必須澄清，沒有顆粒狀物，否則容易堵塞層析柱。
2.樣品緩沖液：樣品緩沖液的pH、離子強(qiáng)度和組成不會顯著性影響結(jié)果的分辨率，只要這些參數(shù)不影響被分離蛋白質(zhì)的大小和穩(wěn)定性，也不超出填料的穩(wěn)定范圍。
3.樣品濃度：凝膠過濾分離效果與樣品量無關(guān)，因此與樣品濃度也沒有關(guān)系。通常蛋白濃度不要超過60mg/mL。樣品的溶解性和粘度會限制樣品濃度，關(guān)鍵在于樣品相對于流動相的粘度，太高的樣品粘度會引起分離的不穩(wěn)定性和不規(guī)則的流動形式，會導(dǎo)致非常寬和成串的峰形，反壓也會增加，因此對于粘度大的樣品需要進(jìn)行稀釋。
樣品體積：在凝膠過濾中，這是重要的參數(shù)之一。一般推薦上樣的體積在1-30%之間，可以做梯度實(shí)驗(yàn)，確定較佳的上樣體積。
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