TaqMan探針法qPCR是使用TaqMan熒光探針進(jìn)行熒光檢測的方法。其基本原理是PCR擴(kuò)增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團(tuán)和一個淬滅熒光基團(tuán)。開始時，探針完整地結(jié)合在DNA任意一條單鏈上，報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收，檢測不到熒光信號；PCR擴(kuò)增時，Taq酶的5'-3'核酸外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而發(fā)出熒光，切割的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，通過檢測PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度可以達(dá)到檢測PCR產(chǎn)物擴(kuò)增量的目的。

圖. TaqMan水解探針作用機(jī)理圖

 1   特異性高、定量準(zhǔn)確

 2   實驗耗時短

因探針法qPCR的高特異性，故無需再設(shè)置熔解曲線檢測擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性如何，大大縮短了實驗時間。

 3   兼容多重反應(yīng)

不同波長的熒光報告基團(tuán)可以標(biāo)記不同的探針，因此可以在同一個反應(yīng)體系中利用不同熒光標(biāo)記的探針同時檢測多個靶標(biāo)，達(dá)到節(jié)省實驗成本的目的。

 1   核酸定量分析

Taqman qPCR技術(shù)可對傳染性疾病進(jìn)行定量定性分析，包括病原微生物或病毒含量的檢測，轉(zhuǎn)基因動植物轉(zhuǎn)基因拷貝數(shù)的檢測，RNAi基因失活率的檢測等。

 2   基因表達(dá)差異分析

 3   基因型/等位基因分析

單核苷酸多態(tài)性（SNPs）是由DNA序列中同一個位置上的堿基對的常見替換造成的個體DNA序列差異。SNP在人類基因組中數(shù)量較多，發(fā)生頻率較高，檢測單核苷酸多態(tài)性對于研究個體對不同疾病的易感性或者個體對特定藥物的不同反應(yīng)有著重要的意義。

 4   藥物開發(fā)研究

 5   無創(chuàng)產(chǎn)前檢查

 6   腫瘤基因檢測

盡管腫瘤發(fā)病的機(jī)理尚未清楚，但相關(guān)基因發(fā)生突變是致癌性轉(zhuǎn)變的根本原因已被廣泛接受。癌基因的表達(dá)增加和突變，在許多腫瘤早期就可以出現(xiàn)。

目前用此方法已進(jìn)行過端粒酶hTERT基因、慢性粒細(xì)胞性白血病WT1基因、腫瘤ER基因、前列腺癌PSM基因、腫瘤相關(guān)的病毒基因等多種基因的表達(dá)檢測。

 7   病原體檢測

Taqman qPCR可以對多種病原體（如人類乳頭瘤病毒、人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒及非洲豬瘟病毒）進(jìn)行定量測定。該技術(shù)對病原體的檢測解決了免疫學(xué)檢測的“窗口期”問題，可判斷疾病是否處于隱性或亞臨床狀態(tài)，適用于傳染病早期的大規(guī)模確診。

非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒（ASFV）感染家豬或野豬引起的一種急性、烈性、高度接觸性傳染病，其發(fā)病率和死亡率可達(dá)100%，嚴(yán)重危害著全球養(yǎng)豬業(yè)，造成難以估量的經(jīng)濟(jì)損失。

目前非洲豬瘟沒有疫苗和有效的治療手段，qPCR法是OIE推薦使用的非洲豬瘟常規(guī)診斷的重要工具，也是中國在現(xiàn)階段非洲豬瘟流行情況下的檢測技術(shù)。