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慢病毒構(gòu)建原理

來源:安諾倫(北京)生物科技有限公司   2021年11月23日 09:32  

慢病毒載體(Lentivirus)是一類改造自人免疫缺陷病毒(HIV)的病毒載體,是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種,基因組是RNA,其毒性基因已經(jīng)被剔除并被外源性目的基因所取代,屬于假型病毒??衫媚孓D(zhuǎn)錄酶將外源基因整合到基因組中實現(xiàn)穩(wěn)定表達(dá),具有感染分裂期與非分裂期細(xì)胞的特性。

◆慢病毒基因組進(jìn)入細(xì)胞后,在細(xì)胞漿中反轉(zhuǎn)錄為DNA,形成DNA整合前復(fù)合體,進(jìn)入細(xì)胞核后,DNA整合到細(xì)胞基因組中。整合后的DNA轉(zhuǎn)錄成mRNA,回到細(xì)胞漿中,表達(dá)目的蛋白;或產(chǎn)生小RNA。慢病毒介導(dǎo)的基因表達(dá)或小RNA干擾作用持續(xù)且穩(wěn)定,并隨細(xì)胞基因組的分裂而分裂。

◆慢病毒載體具有宿主范圍廣,基因容量大等特點。體外應(yīng)用時,慢病毒載體能夠有效地感染培養(yǎng)的神經(jīng)元、肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、干細(xì)胞等多種類型原代細(xì)胞和大部分細(xì)胞系。由于慢病毒的感染具有整合特性,其能夠?qū)⑼庠椿蛴行У卣系剿拗魅旧w上,因而可以達(dá)到持久性表達(dá),從而構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株,用于基因的細(xì)胞功能研究。

◆體內(nèi)應(yīng)用時,慢病毒載體的應(yīng)用不如rAAV載體應(yīng)用廣泛,因為其具有一定的免疫原性,且隨機(jī)整合特性可能導(dǎo)致細(xì)胞功能基因的異常。相比較腺相關(guān)病毒,慢病毒的擴(kuò)散范圍較小,但其表達(dá)更快、基因容量更大(可容納4kb),可作為大容量基因的載體。


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