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一文Get外泌體分離技術

來源：翌圣生物科技（上海）股份有限公司 2021年11月23日 09:55

一文Get外泌體分離技術

外泌體是直徑為30-150 nm的小細胞外囊泡。在生理和病理條件下，幾乎所有類型的細胞都可以釋放外泌體，在細胞通訊和表觀遺傳調(diào)控中發(fā)揮重要作用。外泌體天然存在于體液中，包括血液，唾液，尿液和腦脊液等，內(nèi)部含有其來源細胞的核酸，蛋白等物質(zhì)，因此基于外泌體的疾病診斷和治療方法得到了深入的研究。但是如何拿到純凈的外泌體一直是外泌體研究所面臨的難題之一，因此研究人員也開發(fā)了許多外泌體分離的方法，來一起看一下吧。

常見外泌體分離方法

差速離心法

離心力從300×g到100,000×g的下進行多次循環(huán)離心，最后收集外泌體顆粒。

密度梯度離心法

等密度梯度超速離心法是通過從下到上逐步降低密度分層（A）。動區(qū)梯度超速離心法由兩個梯度介質(zhì)部分組成，樣品根據(jù)密度/質(zhì)量/大小被依次分離（B）。

超濾法

超濾的外泌體分離示意圖。(A）串聯(lián)配置的微濾器，細胞外液通過串聯(lián)配置的微濾器收集外泌體。(B) 順序超濾，細胞外液依次通過不同直徑的過濾器收集外泌體。

切向流過濾

在切向流過濾過程中，進料流與膜面平行流動，施加的壓力使一部分水流根據(jù)過濾器的大小通過膜從而分離外泌體。

尺寸排阻層析

尺寸排除層析法的外泌體分離，溶液通過固定相，分子根據(jù)大小尺寸進行分離。

聚合物沉淀

聚合物沉淀含有外泌體的溶液中加入高親水性聚合物后，降低外泌體的溶解度并誘導其隨后的沉淀。

免疫親和捕獲

基于免疫親和的外泌體分離示意圖。識別外泌體特異性標志物的抗體和外泌體的流體一起孵育富集外泌體，通過額外的洗脫步驟收集外泌體。

微流體

集成微流體技術結合了外泌體分離和分析，將含外泌體的流體添加到介質(zhì)中后，根據(jù)細胞外囊泡的物理和生化特性，分離外泌體，可以從少量體液中快速分離外泌體，并進行實時外泌體表征分析以進行原位診斷。

外泌體分離方法比較

差速離心法

• 優(yōu)點：低成本低試劑污染，適合大量制備。

• 缺點：費時費力，有設備要求，易有蛋白質(zhì)聚集影響純度，不適合少量樣本。

密度梯度離心法

• 優(yōu)點：純度高，可以分離外泌體亞群。

• 缺點：設備要求高，費時間，不適合少量樣本。

超濾分離

• 優(yōu)點：成本低，速度快。

• 缺點：純度一般，剪切應力可能造成外泌體損傷，濾膜可能會導致外泌體損失。

尺寸排阻分離

• 優(yōu)點：高純度，耗時短，保持外泌體的天然狀態(tài)，良好的重復性，樣本量適用范圍廣，樣本類型適用范圍廣。

• 缺點：成本高，需要額外的外泌體富集方法。

聚合物沉淀

• 優(yōu)點：操作簡單，樣本量適用范圍廣，效率高。

• 缺點：蛋白質(zhì)聚集合其他囊泡的污染，可能影響后續(xù)的分析和量化。

免疫親和捕獲

• 優(yōu)點：適用于特定來源的外泌體，純度高，方便，無試劑污染。

• 缺點：抗體成本高，外泌體標記需要篩選優(yōu)化，產(chǎn)量低，洗脫可能會損傷外泌體結構。

微流控技術

• 優(yōu)點：高效方便，可實現(xiàn)自動化并和診斷。

• 缺點：只適合小樣本分離。

翌圣生物外泌體分離試劑盒，為你提供簡單，快速，高效的外泌體分離辦法，只需要簡單4步，就可以從血液，細胞上清，腦脊液，唾液，腹水，羊水等多種樣品中分離出大量形態(tài)完好的外泌體。

分離產(chǎn)物經(jīng)過電鏡分析，NTA粒徑分析和WB實驗三大外泌體金標準驗證，滿足您的下游實驗需求。

產(chǎn)品信息

貨號	名稱	規(guī)格
41201ES25/50	Hieff^® Quick exosome isolation kit（for Cell Culture Media）細胞培養(yǎng)上清外泌體快速抽提試劑盒	25/50 mL
41202ES30	Hieff^®Quick exosome isolation kit（for Serum/Plasma）血清/血漿外泌體快速抽提試劑盒	30 mL
41204ES10/30^new	Hieff^® Quick exosome isolation kit（for Body Fluids）體液外泌體快速抽提試劑盒	10/30 T
41203ES05	Exosome identification kit for Westernblot 外泌體鑒定試劑盒	5 T
52321ES05	GW 4869 (hydrochloride hydrate)外泌體抑制劑	2 mg

參考文獻

Yang D, Zhang W, Zhang H, Zhang F, Chen L, Ma L, Larcher LM, Chen S, Liu N, Zhao Q, Tran PHL, Chen C, Veedu RN, Wang T. Progress, opportunity, and perspective on exosome isolation - efforts for efficient exosome-based theranostics. Theranostics. 2020 Feb 19;10(8):3684-3707. doi: 10.7150/thno.41580. PMID: 32206116; PMCID: PMC7069071.

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