蛋白掛柱后洗脫不下來主要是因為蛋白和柱子結(jié)合能力太強或者洗脫條件太溫和,我們可以從以下幾方面考慮解決問題。
1、洗脫條件太溫和:重新摸索洗脫條件,增加緩沖液中咪唑濃度或者適當降低緩沖液pH以確定最佳的洗脫條件或者更、換緩沖液的成分(換成tris-HCl緩沖液)。
2、蛋白在柱子中沉淀:適當降低上樣量或蛋白濃度,用咪唑線性洗脫。使用添加劑或者改變NaCl的濃度,或者在變性的條件下洗脫(加4-8M的尿素或者4-6M的鹽酸胍)。
3、非特異性的疏水或者其他作用:在洗脫液中加非離子的添加劑(例如0.2%的Triton X-100)或者增加NaCl的濃度。
4、蛋白和柱子接觸時間過長:可以減少蛋白和柱子的接觸時間。
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