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做實(shí)驗(yàn)不會(huì)制備細(xì)胞爬片怎么行?

來源:安諾倫(北京)生物科技有限公司   2021年12月01日 15:02  

我們?cè)谧雒庖邿晒?svg width="8px" height="8px" viewbox="0 0 15 15" class="css-ukqak1">(IF),激光共聚焦(Confocal),凋亡檢測(cè)(TUNEL)時(shí),免不了要制備細(xì)胞爬片,爬片質(zhì)量*決定了最后拍照的質(zhì)量以及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的精準(zhǔn)性。今天,就教大家如何制備好的細(xì)胞爬片。



一. 實(shí)驗(yàn)材料及試劑

蓋玻片、培養(yǎng)板、酒精燈、鑷子等;75%乙醇、DMEM*培養(yǎng)基(RPMI-1640*培養(yǎng)基)、胰酶等。

二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

爬片準(zhǔn)備:

1、24*24蓋玻片,剛好用于6孔板。也可用更大的蓋玻片,放在大的培養(yǎng)皿中爬片。

2. 蓋玻片泡酸過夜,第二天先用自來水沖洗20遍,再置于無水酒清中浸泡6小時(shí),再用三蒸水沖洗3遍(個(gè)人認(rèn)為主要目的是將酸沖洗干凈就可以了,如果不干凈的話,細(xì)胞帖壁不好),放在飯盒或者玻璃培養(yǎng)皿中烘干后進(jìn)行高壓消毒、烤干。

3.蓋玻片浸泡75%乙醇10分鐘消毒,然后酒精燈上烤干,直接放入培養(yǎng)皿,開始種細(xì)胞。重點(diǎn)是玻片是干凈的、無菌的。

4.蓋玻片在液體中經(jīng)常有貼壁吸附力,用一般鑷子很難一次性?shī)A起,將注射器針頭針尖向背面弄個(gè)小鉤,這樣將爬片輕輕勾起,用小鑷子取出就可以。

細(xì)胞進(jìn)行爬片:

1. 胰酶消化細(xì)胞后計(jì)數(shù)重懸細(xì)胞于*培養(yǎng)基中(懸浮細(xì)胞直接離心)。

2. 加細(xì)胞時(shí),根據(jù)玻片的大小,先在每個(gè)孔里準(zhǔn)備放爬片的位置滴少量培養(yǎng)基,目的是使玻片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起,然后放玻片,防止加細(xì)胞懸液時(shí)玻片漂起,造成雙層細(xì)胞貼片。整個(gè)過程注意無菌操作。

3. 根據(jù)自己的需要選擇合適的細(xì)胞密度種入培養(yǎng)板內(nèi)即可

保存細(xì)胞爬片時(shí),一般用培養(yǎng)皿或避光濕盒,先在皿底放一層面巾紙,然后再放爬片,這樣方便做實(shí)驗(yàn)時(shí)取片。然后蓋上蓋子,并在蓋子上做標(biāo)記,為避免混淆。一般-20℃保存2-3月的片子去拍照沒有問題的。制備好的細(xì)胞爬片是不是很簡(jiǎn)單呢?

三、注意事項(xiàng)

1. 使用細(xì)胞爬片時(shí)(比如在六孔板中放入爬片,六孔板的孔底面積往往會(huì)比爬片面積多出一部分,加細(xì)胞懸液時(shí)常常就是細(xì)胞鋪滿整個(gè)孔底,有時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)邊集現(xiàn)象,就是靠近壁邊緣密度要高些,這樣處于中央玻片上爬的細(xì)胞數(shù)量就可能相對(duì)較少)。比較好的做法是將玻片放入孔板的孔內(nèi)后,加細(xì)胞懸液時(shí)只滴到玻片上,一直滴到液體布滿整個(gè)玻片又不會(huì)溢出玻片邊緣。

2. 按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),作用一定時(shí)間后取玻片。注意細(xì)胞不能太密,否則容易掉片。


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