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蛋白定量有哪些方法?

來(lái)源:安諾倫(北京)生物科技有限公司   2021年12月03日 09:25  

蛋白定量的方法有很多種,應(yīng)用較多的主要有兩種:BCA蛋白定量檢測(cè)法和Bradford蛋白定量檢測(cè)法,市售的蛋白定量試劑盒也多基于上述兩種檢測(cè)方法而開(kāi)發(fā)的。兩種方法均需配制蛋白標(biāo)準(zhǔn)品,蛋白與定量試劑經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的反應(yīng)(BCA法反應(yīng)為37℃、20-30min,Bradford法反應(yīng)一般為37℃,5min),酶標(biāo)儀讀取樣品的OD值,繪制的蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線,依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算WB蛋白的濃度。兩種檢測(cè)方法筆者均有使用經(jīng)驗(yàn),相比BCA法,Bradford法不僅節(jié)省反應(yīng)時(shí)間,也無(wú)需配置反應(yīng)試劑,簡(jiǎn)單、快速、好用,筆者推薦Bradford法測(cè)定蛋白濃度。

嚴(yán)格來(lái)說(shuō),每次的蛋白濃度測(cè)定均需配制新鮮蛋白標(biāo)準(zhǔn)品,保證每次測(cè)到的蛋白濃度的準(zhǔn)確性。然而,WB法評(píng)估蛋白表達(dá)水平本身就是一種半定量或者相對(duì)定量,因此在實(shí)際蛋白樣本準(zhǔn)本及濃度測(cè)定時(shí)只需保證均一性即可,即使用同樣的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算同一批蛋白的濃度,如果計(jì)算準(zhǔn)備即可保證蛋白上樣時(shí)內(nèi)參水平基本一致。因此,在實(shí)際操作中我們只需測(cè)定一次標(biāo)準(zhǔn)品的OD值、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可用此曲線來(lái)計(jì)算后續(xù)實(shí)驗(yàn)蛋白的濃度,節(jié)省時(shí)間和試劑。

具體的蛋白定量步驟,各位朋友參考試劑盒提供的方法即可,簡(jiǎn)單易行。至于標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制,網(wǎng)絡(luò)亦可查到不是帖子介紹用不同軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

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