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T7 RNA Polymerase，即T7 RNA聚合酶，是T7噬菌體DNA編碼的酶，對T7啟動子序列具有高度特異性。本酶是依賴于DNA的RNA聚合酶，具有 5′→3′的RNA聚合酶活性，可以催化單鏈或雙鏈DNA T7啟動子下游NTP的摻入，合成與T7啟動子下游的模板DNA互補(bǔ)的RNA。 產(chǎn)品特點： 該酶對T7啟動子具有高度特異性，不識別其它生物來源的啟動子。可以識別修飾的核苷酸，例如生物素標(biāo)記、熒光素標(biāo)記、放射性同位素、地高標(biāo)記dNTP，用于各種標(biāo)記RNA的合成，進(jìn)行下游實驗。 質(zhì)量保證： 1.SDS-PAGE膠檢測僅可見清晰單一的目的條帶，毛細(xì)管電泳檢測純度在95%以上； 2.酶動力學(xué)實時熒光法顯示無DNA酶及RNA酶污染； 3.光度測定法顯示內(nèi)毒素含量≤10 EU/mg。 純度驗證  RNA酶殘留定量檢測
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應(yīng)用實例
【RNA體外轉(zhuǎn)錄合成】
1. 在RNase free的離心管中加入右側(cè)表格中各組分配制反應(yīng)體系
2. 將上述反應(yīng)液混合均勻，低速離心至管底，37℃孵育4個小時。若轉(zhuǎn)錄本長度小于100 nt,增加反應(yīng)時間至4-8個小時；
3. 轉(zhuǎn)錄后取樣品進(jìn)行凝膠電泳，取樣1µL稀釋到5 µL,然后用1%的瓊脂糖凝膠進(jìn)行檢測，以確定轉(zhuǎn)錄是否成功.
4. 反應(yīng)完成后，加入DNase 1 (RNase free) , 37 ℃孵育30 min以去除模板DNA.
注：
(I)為了特定區(qū)域的有效轉(zhuǎn)錄，建議在其區(qū)域下游把模板DNA預(yù)先切成平端或5‘突出末端.
(2)反應(yīng)體系于室溫配置。由于10xTranscription Buflfer中含有亞精胺，低溫下亞精胺濃度過高容易引起DNA模板沉淀，建議最后加入模板DNA.
(3)建議在PCR儀中進(jìn)行反應(yīng)，為防止蒸發(fā)，建議開啟熱蓋功能.
(4)使用試劑、容器等無RNA酶污染。
| 組分 | 體積 |
| DNase RNase-Free Water | Up to 20 µL |
| ATP/CTP/GTP/UTP(100mM each) | 2µL each |
| 10x Transcription Bufler | 2 µL |
| DNA template | 0.5-2µg |
| RNase Inhibitor (40 U/µL) | 0.5 µL |
| Inorganic PyTophosphatase(0.1U/µL) | 0.5µL |
| T7RNA Polymerase (1000 U/µL) | 0.2 ~ 1 µL |
| Mg2+ (400 mM) | 1 µL |
| Total Volume | 20 µL |
產(chǎn)品信息
| 貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
| abs60153 | T7 RNA 聚合酶 | 50KU/200KU/1000KU |
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