人抗Scl-70IgG抗體(Scl-70 IgG)ELISA試劑盒的操作流程和注意事項

樣本處理及要求

1. 血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20

分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000

×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

3. 組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞

會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量

體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整，并做好記

錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂

解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。后將勻漿液于5000×g離心5~10

分鐘，取上清檢測。

4. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯?/span>

于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。訂購聯(lián)系當?shù)亟?jīng)銷商 技術：經(jīng)銷商轉(zhuǎn)廠家

注：標本溶血會影響后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

需要而未提供的試劑和器材

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

試劑盒組成

名稱 96 孔配置 48 孔配置 備注

微孔酶標板 12 孔×8 條 12 孔×4 條 無

標準品 0.3mL*6 管 0.3mL*6 管 無

樣本稀釋液 6mL 3mL 無

檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無

20×洗滌緩沖液 25mL 15mL 按說明書進行稀釋

底物 A 6mL 3mL 無

底物 B 6mL 3mL 無

終止液 6mL 3mL 無

封板膜 2 張 2 張 無

說明書 1 份 1 份 無

自封袋 1 個 1 個 無

備注：

1. 標準品濃度依次為：48、24、12、6、3、1.5 nmol/L

2. 經(jīng)過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi)，實驗過程中

直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過大標準品濃度時，可用樣本稀釋液將標本

進行適當稀釋后再進行實驗。

注意事項

1. 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室

溫 20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中

不要讓微孔干燥掉。

3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響 OD 值。

4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。

6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。訂購聯(lián)系當?shù)亟?jīng)銷商 技術：經(jīng)銷商轉(zhuǎn)廠家

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞

試劑盒中反應試劑的生物活性。

9. 不能使用過期產(chǎn)品。

10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。

試劑準備

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡后方可使用。

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

操作步驟

1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。

2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL；

3. 樣本孔中加入待測樣本 50μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體

100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置 1min，甩去洗滌液，吸水

紙上拍干，如此重復洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。

6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

7. 每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。